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杂交瘤融合筛选
SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞
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产品基本信息
产品货号
BDXB-0001
产品名称
SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞
类别
杂交瘤融合筛选
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Q1:
为什么长得慢
刚复苏后细胞状态差且会出现部分死细胞,隔夜或隔天换液去除死细胞,或者换液的同时从原皿中取1ml到新的培养皿中培养,可适当提高培养基血清用量。
Q2:
为什么吹不下来
SP2/0为悬浮细胞,细胞圆形透亮,呈现葡串状。一般用1ml枪头吹悬即可。
Q3:
细胞来源及授权
SP2/0细胞来源自抗体药物企业,做抗体的效果非常。 一般抗体药物企业,对杂交瘤制备这块没有明确的需求,他们做完杂交瘤后,要去做基因工程抗体,然后用CHO等细胞表达;他们对这个CHO等细胞必须要有明确的授权,明确的遗传信息。 我们不提供遗传信息且不提供授权。
Q4:
产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基
换用培养基,可能导致细胞培养不成功。收到后必须用和原产品培养基一致的RPMI-1640(Gibco?11875)培养基,做好细胞培养传代冻存后,可以尝试更换其他培养基。 拿到sp20细胞株,无论是冻存状态还是复苏状态,都必须先用1640培养基把细胞培养到较好的状态,然后有需要可以采用半换液的方式(首先50%1640+50%DEME,然后25%1640+75%DEME,最后100%DEME),逐步换到DEME培养基。
Q5:
什么是骨髓瘤细胞8-AG培养基
8-AG(即8-氮鸟嘌呤)是一种碱性细胞杀伤因子。细胞DNA的合成主要是两个途径,一个是主要途径,一个是补救途径,而HGPRT酶(即次黄嘌呤-鸟嘌呤核糖转移酶)是补救途径嘌呤的主要合成酶,正常情况下,细胞可以同时通过这两种途径来合成DNA。而8-AG也是一种嘌呤,自然也可以被认为是一种合成DNA的原料,但由于它是有毒的,它的存在会杀死细胞。而HGPRT酶缺陷的骨髓瘤细胞不能通过补救途径合成DNA,所以就可以存活。因而经8-AG筛选后的sp2/0细胞都是HGPRT酶缺陷株。
Q6:
为什么长得慢
刚复苏后细胞状态差且会出现部分死细胞,隔夜或隔天换液去除死细胞,或者换液的同时从原皿中取1ml到新的培养皿中培养,可适当提高培养基血清用量。
Q7:
为什么吹不下来
SP2/0为悬浮细胞,细胞圆形透亮,呈现葡串状。一般用1ml枪头吹悬即可。
Q8:
细胞来源及授权
sp2/0细胞来源自抗体药物企业,做抗体的效果非常好。 一般抗体药物企业,对杂交瘤制备这块没有明确的需求,他们做完杂交瘤后,要去做基因工程抗体,然后用CHO等细胞表达;他们对这个CHO等细胞必须要有明确的授权,明确的遗传信息。 我们不提供遗传信息且不提供授权。
Q9:
产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基
换用培养基,可能导致细胞培养不成功。收到后必须用和原产品培养基一致的RPMI-1640(Gibco 11875)培养基,做好细胞培养传代冻存后,可以尝试更换其他培养基。 拿到sp20细胞株,无论是冻存状态还是复苏状态,都必须先用1640培养基把细胞培养到较好的状态,然后有需要可以采用半换液的方式(首先50%1640+50%DEME,然后25%1640+75%DEME,最后100%DEME),逐步换到DEME培养基。
Q10:
SP2/0 培养需不需经常要用8-氮鸟嘌呤去复壮?8AG的剂量是多少?
不需要经常复壮,为了保持HGPRT- SP2/0细胞的遗传稳定,可每连续培养3个月左右,添加一次8-氮鸟嘌呤进行筛选。8-氮杂鸟嘌呤参考剂量0.00013 M,或可查询市面产品说明书推荐剂量,该试剂具有一定毒性,细胞少量死亡属于正常现象,若大量死亡,需进一步稀释测试。 工作原理:8-氮杂鸟嘌呤(8-Azaguanine)是一种嘌呤类似物,能抑制微生物、病毒、肿瘤细胞的增殖。在含有HGPRT酶(即次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)的细胞中,8-Azaguanine会被细胞当成DNA的合成原料利用,但由于它是有毒的,所以它可以导致HGPRT+的细胞死亡,而HGPRT-的细胞可以存活。 常见的HGPRT-融合伴侣细胞如SP2/0,FO,Ag14,NS1等,可以在含8-氮杂鸟嘌呤的培养基中存活,因此常用8-氮杂鸟嘌呤来进行筛选优化,保证这些细胞仍然对HAT筛选培养基敏感,从而在细胞融合后未参与融合的伴侣细胞可以被有效抑制生长。
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