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Q1: SP2/0 培养需不需经常要用8-氮鸟嘌呤去复壮？8AG的剂量是多少？

不需要经常复壮，为了保持HGPRT- SP2/0细胞的遗传稳定，可每连续培养3个月左右，添加一次8-氮鸟嘌呤进行筛选。8-氮杂鸟嘌呤参考剂量0.00013 M，或可查询市面产品说明书推荐剂量，该试剂具有一定毒性，细胞少量死亡属于正常现象，若大量死亡，需进一步稀释测试。工作原理：8-氮杂鸟嘌呤（8-Azaguanine）是一种嘌呤类似物，能抑制微生物、病毒、肿瘤细胞的增殖。在含有HGPRT酶（即次黄嘌呤－鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）的细胞中，8-Azaguanine会被细胞当成DNA的合成原料利用，但由于它是有毒的，所以它可以导致HGPRT+的细胞死亡，而HGPRT-的细胞可以存活。常见的HGPRT-融合伴侣细胞如SP2/0，FO，Ag14，NS1等，可以在含8-氮杂鸟嘌呤的培养基中存活，因此常用8-氮杂鸟嘌呤来进行筛选优化，保证这些细胞仍然对HAT筛选培养基敏感，从而在细胞融合后未参与融合的伴侣细胞可以被有效抑制生长。

Q2: 产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基

换用培养基，可能导致细胞培养不成功。收到后必须用和原产品培养基一致的RPMI-1640（Gibco 11875）培养基，做好细胞培养传代冻存后，可以尝试更换其他培养基。拿到sp20细胞株，无论是冻存状态还是复苏状态，都必须先用1640培养基把细胞培养到较好的状态，然后有需要可以采用半换液的方式（首先50%1640+50%DEME，然后25%1640+75%DEME，最后100%DEME），逐步换到DEME培养基。

Q3: 细胞来源及授权

sp2/0细胞来源自抗体药物企业，做抗体的效果非常好。一般抗体药物企业，对杂交瘤制备这块没有明确的需求，他们做完杂交瘤后，要去做基因工程抗体，然后用CHO等细胞表达；他们对这个CHO等细胞必须要有明确的授权，明确的遗传信息。我们不提供遗传信息且不提供授权。

Q4: 为什么吹不下来

SP2/0为悬浮细胞，细胞圆形透亮，呈现葡串状。一般用1ml枪头吹悬即可。

Q5: 为什么长得慢

刚复苏后细胞状态差且会出现部分死细胞，隔夜或隔天换液去除死细胞，或者换液的同时从原皿中取1ml到新的培养皿中培养，可适当提高培养基血清用量。

Q6: 什么是骨髓瘤细胞8-AG培养基

8－AG（即8－氮鸟嘌呤）是一种碱性细胞杀伤因子。细胞DNA的合成主要是两个途径，一个是主要途径，一个是补救途径，而HGPRT酶（即次黄嘌呤－鸟嘌呤核糖转移酶）是补救途径嘌呤的主要合成酶，正常情况下，细胞可以同时通过这两种途径来合成DNA。而8－AG也是一种嘌呤，自然也可以被认为是一种合成DNA的原料，但由于它是有毒的，它的存在会杀死细胞。而HGPRT酶缺陷的骨髓瘤细胞不能通过补救途径合成DNA，所以就可以存活。因而经8－AG筛选后的sp2/0细胞都是HGPRT酶缺陷株。

Q7: 产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基

换用培养基，可能导致细胞培养不成功。收到后必须用和原产品培养基一致的RPMI-1640（Gibco?11875）培养基，做好细胞培养传代冻存后，可以尝试更换其他培养基。拿到sp20细胞株，无论是冻存状态还是复苏状态，都必须先用1640培养基把细胞培养到较好的状态，然后有需要可以采用半换液的方式（首先50%1640+50%DEME，然后25%1640+75%DEME，最后100%DEME），逐步换到DEME培养基。

Q8: 细胞来源及授权

SP2/0细胞来源自抗体药物企业，做抗体的效果非常。一般抗体药物企业，对杂交瘤制备这块没有明确的需求，他们做完杂交瘤后，要去做基因工程抗体，然后用CHO等细胞表达；他们对这个CHO等细胞必须要有明确的授权，明确的遗传信息。我们不提供遗传信息且不提供授权。

Q9: 为什么吹不下来

SP2/0为悬浮细胞，细胞圆形透亮，呈现葡串状。一般用1ml枪头吹悬即可。

常见问题

Q1: SP2/0 培养需不需经常要用8-氮鸟嘌呤去复壮？8AG的剂量是多少？

Q2: 产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基

Q3: 细胞来源及授权

Q4: 为什么吹不下来

Q5: 为什么长得慢

Q6: 什么是骨髓瘤细胞8-AG培养基

Q7: 产品信息用的是1640培养基能否改用DMEM培养基

Q8: 细胞来源及授权

Q9: 为什么吹不下来

Q10: 为什么长得慢