HRP标记试剂盒

货号: BF06095S

1700.000.00

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  • ¥ 1700.00 / 1000μg
    ¥ 4000.00 / 5000μg

产品基本信息

  • 产品货号 BF06095S
  • 产品名称 HRP标记试剂盒
  • 类别 杂交瘤融合筛选

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产品详情

特别说明:
1、本试剂盒里的标记终止液组分为冻干粉,必须现配现用,标记终止液的独立包装数量决定了试剂盒可以独立使用的实验次数。

2、本试剂盒1000μg规格产品,可以独立完成2次实验(含2支标记终止液)。

3、本试剂盒5000μg规格产品,可以独立完成5次实验(含5支标记终止液)。

 

HRP标记试剂盒
HRP Labeling Kit
 

货号 HRP 可标记抗体量 可标记蛋白量
BF06095S-1000 1mg 1mg 0.25-1mg
BF06095S-5000 5mg 5mg 1.25-5mg

推荐标记比例:(抗体:HRP标记质量比为 1:1;抗原:HRP质量比为1:1~ 1:4左右)
声明:此处数据只做参考,客户可依据标记效果进行比例调整;
 
成分:

名称 BF06095-1000 BF06095-5000 备注
  规格/数量 规格/数量  
活化HRP液体 1mg/1 5mg/1 10mg/ml
标记启动液 0.5ml/1 2ml/1 \
标记终止液(冻干粉) 2 5 用前加入1ml去离子水溶解,现配现用
标记物保存液 1.5ml/1 6ml/1 含有甘油
备用透析袋(MD6,截留量12KD) 4X4CM/4 10X5CM/10 \
可以完成独立实验次数 2 5 标记终止液每支配好后仅限一次使用

冰袋运输,4℃保存,有效期12个月。
 

  • 产品描述
本试剂盒采用高碘酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶(HRP)的糖基,经过氧化以后活化的HRP 带有醛基可以与待标记物的游离氨基结合,发生希夫碱反应(Schiff's Base Reaction)。本试剂盒适用于带有游离氨基的物质的标记,比如:带有游离氨基(伯胺)的小分子化合物,蛋白或抗体。
本试剂盒采用特有稳定技术,活化HRP保存在液体中,吸取方便,最小可以标记100ug,让您的标记工作更易把控和操作!
 
  • 使用方法
准备标记物:首先去除待标记物(蛋白或者抗体)中的叠氮钠、甘油、氨基物质(包括甘氨酸、Tris等)、EDTA等物质。可采用透析或超滤的方法置换缓冲液,以除去以上物质,以达到最佳标记效果。透析缓冲液首选0.01M CB,PH:9.6 缓冲液(说明书附件有经验配方无需调整PH),若实验室没有碳酸盐试剂再采用0.01M PBSPH:7.0-7.4均可)透析或超滤置换缓冲液,最后将抗体/蛋白调整到浓度2mg/ml;如果抗体和蛋白不含上述这些干扰物质可以直接用上述PBSCB缓冲液调整浓度到2mg/ml备用。对于小分子物质不建议直接标记HRP,若仍需标记,需要自行摸索浓度,保证HRP的比例过量,如果不能确保HRP过量,标记完之后最好透析或过滤除去未标记的小分子物质。

以下以标记1mg抗体(2mg/ml)为例详细说明实验流程
  1. 实验前准备
   4℃中取出HRP标记试剂盒,各组分使用前混匀。
  1. 标记反应
待标记抗体 500µl1mg2mg/ml),加入预活化HRP100ul1mg,抗体:HRP标记质量比按照 11) 用移液器反复吹打几次以充分混匀,混匀后加入HRP标记启动液108ul,(加入启动液量比例:每10ul(抗体和HRP混合液)加1.8ul启动液)继续混匀数次,避免产生气泡。然后避光30-37℃温箱偶联反应2-3小时,若遇快要下班也可放4℃反应24小时左右(此法效果一样或者更好不必担心)。
  1. 标记反应终止
单支标记终止液(冻干粉)中加入1ml去离子水配成标记终止液,取50ul加入步骤2所述反应液中(加入标记终止液量比例:每1mg HRP加入终止液50ul),充分混匀,室温放置1小时或者42小时。(注:标记终止液不稳定,不能保存,必须现配现用)
  1. 标记物产物收集与保存
终止完成后,加入等体积的标记物保存液,充分混匀,置于-20℃可以保存一年。如果想更长期的保存建议先用0.067M PBS  PH:7.0(说明书附件有经验配方)透析或超滤置换缓冲液后再加标记物保存液。这样可以保存3年左右甚至更长。
反应体系摘要:
溶液名称:待标记抗体+活化HRP+标记启动液+标记终止液+保存液
溶液体积:  500µl   +  100µl  +    108µl   +  50µl    + 758µl =1516µl
 
  • 注意事项:
  1. 待标记物缓冲液成分过于复杂以及含有氨基小分子和NAN3的初始缓冲液必须透析或超滤置换掉,请采用0.01M PBSPH:7.0-7.4均可)或0.01M CBPH:9.6缓冲液均可。
  2. 如果待标记物不是抗体是其它蛋白,那么请根据分子量参考蛋白和酶用量:若分子量在40KD以上建议1mg蛋白使用1mg HRP;如果分子量在30KD左右,建议1mg蛋白使用1.3mg HRP;如果分子量在20KD左右,建议1mg蛋白使用2mg HRP;如果分子量在10KD左右,建议1mg蛋白使用4mg HRP;此时启动液和终止液请按步骤23描述标准适量加入;如果标记量为小于1mg的抗体或蛋白(最小可以0.1mg),HRP和其它试剂加入量按比例折算即可。
  3. 小分子药物不建议直接标记HRP,因为HRP的结构不能结合足够的药物会造成效价偏低,这种情况建议先偶联BSA增加小分子偶联量再进行HRP标记,这样效果会非常好。
  4. 如果待标记物含有其它蛋白需要把无关蛋白同样计算进去,尽快如此也请您慎重选择这样的样品进行标记。
  5. 本试剂盒保存4℃可以保证1年内开启有效,活化HRP开启后小心取用切勿污染碱性物质。
  6. 终止液干粉5000ug规格5/1000ug规格2支,原则上每一支配好后仅限一次性使用,因此您可以根据您的实验总量合理配制使用。
Trouble Shooting
问题 原因 方法
标记后抗体效价低
  1. 抗体溶液中残留了游离氨基
  2. 显色系统失效
  3. 有些抗体较脆弱,酶标后易失活
  1. 进一步透析
  2. 先确认显色系统工作正常
  3. 采用其他方法标记

附件:
10.01M CBPH:9.6 缓冲液配制:取NaHCO3, 0.67gNa2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可,不用调节PH
20.067M PBS,  PH:7.0 缓冲液配制:取NaH2PO4.2H2O5.35gNa2HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL9g加水1L溶解完全,最后添加NaOH0.35g再次混匀后即可,不用再调节PH


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描述
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