产品基本信息

• 产品货号 BF06095S
• 产品名称 HRP标记试剂盒
• 类别 杂交瘤融合筛选
• 产品描述

  特别说明：
  1、本试剂盒里的标记终止液组分为冻干粉，必须现配现用，标记终止液的独立包装数量决定了试剂盒可以独立使用的实验次数。

  2、本试剂盒1000μg规格产品，可以独立完成2次实验（含2支标记终止液）。

  3、本试剂盒5000μg规格产品，可以独立完成5次实验（含5支标记终止液）。

   

  HRP标记试剂盒
  HRP Labeling Kit
   

  货号	HRP量	可标记抗体量	可标记蛋白量
  BF06095S-1000	1mg	1mg	0.25-1mg
  BF06095S-5000	5mg	5mg	1.25-5mg

  推荐标记比例：（抗体:HRP标记质量比为 1：1；抗原:HRP质量比为1：1~ 1：4左右）
  声明：此处数据只做参考，客户可依据标记效果进行比例调整；
   
  成分：

  名称	BF06095-1000	BF06095-5000	备注
  	规格/数量	规格/数量
  活化HRP液体	1mg/1支	5mg/1支	10mg/ml
  标记启动液	0.5ml/1支	2ml/1支	\
  标记终止液（冻干粉）	2支	5支	用前加入1ml去离子水溶解，现配现用
  标记物保存液	1.5ml/1支	6ml/1支	含有甘油
  备用透析袋(MD6，截留量12KD)	4X4CM/4个	10X5CM/10个	\
  可以完成独立实验次数	2次	5次	标记终止液每支配好后仅限一次使用

  冰袋运输，4℃保存，有效期12个月。
   

  • 产品描述
  本试剂盒采用高碘酸钠氧化法活化辣根过氧化物酶（HRP）的糖基，经过氧化以后活化的HRP 带有醛基可以与待标记物的游离氨基结合，发生希夫碱反应（Schiff's Base Reaction）。本试剂盒适用于带有游离氨基的物质的标记，比如：带有游离氨基（伯胺）的小分子化合物，蛋白或抗体。
  本试剂盒采用特有稳定技术，活化HRP保存在液体中，吸取方便，最小可以标记100ug，让您的标记工作更易把控和操作！
   
  • 使用方法
  准备标记物：首先去除待标记物（蛋白或者抗体）中的叠氮钠、甘油、氨基物质（包括甘氨酸、Tris等）、EDTA等物质。可采用透析或超滤的方法置换缓冲液，以除去以上物质，以达到最佳标记效果。透析缓冲液首选0.01M CB,PH:9.6 缓冲液(说明书附件有经验配方无需调整PH），若实验室没有碳酸盐试剂再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超滤置换缓冲液，最后将抗体/蛋白调整到浓度2mg/ml；如果抗体和蛋白不含上述这些干扰物质可以直接用上述PBS或CB缓冲液调整浓度到2mg/ml备用。对于小分子物质不建议直接标记HRP，若仍需标记，需要自行摸索浓度，保证HRP的比例过量，如果不能确保HRP过量，标记完之后最好透析或过滤除去未标记的小分子物质。
  
  以下以标记1mg抗体（2mg/ml）为例详细说明实验流程
  1. 实验前准备
     从4℃中取出HRP标记试剂盒，各组分使用前混匀。
  2. 标记反应
  待标记抗体 500µl（1mg，2mg/ml），加入预活化HRP（100ul，1mg，抗体:HRP标记质量比按照 1：1) 用移液器反复吹打几次以充分混匀，混匀后加入HRP标记启动液108ul，（加入启动液量比例：每10ul（抗体和HRP混合液）加1.8ul启动液）继续混匀数次，避免产生气泡。然后避光30℃-37℃温箱偶联反应2-3小时，若遇快要下班也可放4℃反应24小时左右（此法效果一样或者更好不必担心）。
  3. 标记反应终止
  单支标记终止液（冻干粉）中加入1ml去离子水配成标记终止液，取50ul加入步骤2所述反应液中（加入标记终止液量比例：每1mg HRP加入终止液50ul），充分混匀，室温放置1小时或者4℃ 2小时。（注：标记终止液不稳定，不能保存，必须现配现用）
  4. 标记物产物收集与保存
  终止完成后，加入等体积的标记物保存液，充分混匀，置于-20℃可以保存一年。如果想更长期的保存建议先用0.067M PBS  PH:7.0（说明书附件有经验配方）透析或超滤置换缓冲液后再加标记物保存液。这样可以保存3年左右甚至更长。
  反应体系摘要：
  溶液名称：待标记抗体+活化HRP+标记启动液+标记终止液+保存液
  溶液体积：  500µl   +  100µl  +    108µl   +  50µl    + 758µl =1516µl
   
  • 注意事项：
  1. 待标记物缓冲液成分过于复杂以及含有氨基小分子和NAN₃的初始缓冲液必须透析或超滤置换掉，请采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB，PH:9.6缓冲液均可。
  2. 如果待标记物不是抗体是其它蛋白，那么请根据分子量参考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建议1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建议1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建议1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建议1mg蛋白使用4mg HRP；此时启动液和终止液请按步骤2和3描述标准适量加入；如果标记量为小于1mg的抗体或蛋白（最小可以0.1mg），HRP和其它试剂加入量按比例折算即可。
  3. 小分子药物不建议直接标记HRP，因为HRP的结构不能结合足够的药物会造成效价偏低，这种情况建议先偶联BSA增加小分子偶联量再进行HRP标记，这样效果会非常好。
  4. 如果待标记物含有其它蛋白需要把无关蛋白同样计算进去，尽快如此也请您慎重选择这样的样品进行标记。
  5. 本试剂盒保存4℃可以保证1年内开启有效，活化HRP开启后小心取用切勿污染碱性物质。
  6. 终止液干粉5000ug规格5支/1000ug规格2支，原则上每一支配好后仅限一次性使用，因此您可以根据您的实验总量合理配制使用。
  Trouble Shooting

  问题	原因	方法
  标记后抗体效价低	抗体溶液中残留了游离氨基 显色系统失效 有些抗体较脆弱，酶标后易失活	进一步透析 先确认显色系统工作正常 采用其他方法标记

  附件：
  1、0.01M CB，PH:9.6 缓冲液配制：取NaHCO₃, 0.67g和Na₂CO₃, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用调节PH。
  2、0.067M PBS,  PH:7.0 缓冲液配制：取NaH₂PO₄.2H₂O，5.35g和Na₂HPO₄.12H₂O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，最后添加NaOH，0.35g再次混匀后即可，不用再调节PH。
  
  
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