产品基本信息

• 产品货号 KX0110049
• 产品名称 BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂
• 类别 转染试剂
• 运输及保存条件 常温运输，4℃保存，稳定保存期12个月。长期保存置于-20℃
• 注意事项 注意事项 （1） 转染前细胞应处于对数生长期的良好状态，推荐细胞传代后12-24小时内转染，细胞密度控制在50%-70%； （2） 使用高纯度的RNA也是转染成功的关键因素，在转染前确定RNA的含量和纯度，实验过程中使用DEPC处理过的耗材和试剂，避免RNase污染；另外RNA与转染试剂复合物制备时盐含量高会导致复合物形成时产生沉淀，因此应将RNA重悬于5%葡萄糖溶液（由无菌DEPC水配制）或DEPC水中，如下（4）中推荐的稀释液； （3） RNA与转染试剂复合物应现配现用；配置后的RNA与转染试剂复合物应于1小时内用于细胞转染； （4） 体外细胞转染时血清的影响：高浓度血清的存在会影响BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂与RNA形成复合物。因此推荐转染过程中使用无血清培养基，以达到复合物形成的最佳效果；如细胞对无血清条件完全不能耐受，则推荐转染过程使用不高于3%含量的血清；复合物进入细胞后(约需4-6小时)，血清的存在并不影响复合物的转染效果，因此转染4-6小时后可加入含血清培养基继续培养细胞； （5） 体外细胞转染推荐稀释液： 5%葡萄糖溶液（w/v，用无菌DEPC水配制）； BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂试剂可用该稀释液稀释，稀释后的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂试剂置于4℃或-20℃保存，两周内稳定； （6） 为了达到更好的转染效果，可根据实验需要优化RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂的配比，推荐优化比例范围为1:2~1:8（w/v, RNA: BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂）； （7） 本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断和治疗。
• 产品描述  

  试剂盒组分	规格	保存
  BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂	0.8ml	4℃保存
  5%葡萄糖溶液（DEPC水配置）	4ml	4℃保存

   
  产品描述
  BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂是一种新型高效阳离子聚合物，其可与RNA (包括siRNA、miRNA)相互作用形成复合物将RNA递送至真核细胞内，具有转染效率高，细胞毒性小，生物相容性好等特点，尤其适合各种高通量细胞筛选实验，方便、快捷、高效。BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂通过内吞作用进入细胞后，表达“质子海绵效应”的特性，缓冲内体pH值，保护RNA不被降解，连续的质子内流也可引起溶酶体渗透肿胀和破裂，为RNA逃逸到细胞质提供了机制。
  产品特色
  n 转染效率高
  n 细胞类型广
  n 细胞安全性高
   
  操作步骤
  1. 将细胞接种在孔板中，细胞密度以及培养液体积如表1所示；
  表1.常用细胞培养装置中细胞接种量以及培养液体积推荐量
   

  细胞培养装置	细胞接种数量	培养液体积 (mL)
  96孔板	(0.5-0.8)×104	0.2
  24孔板	(2.5-3)×104	0.5
  12孔板	(1-1.5)×105	1
  6孔板	(3-3.5)×105	2
  100 mm培养皿	(0.8-1)×106	10

   
  2. 过夜待细胞贴壁后，弃去细胞培养液，加入BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂与RNA复合物的混合工作液，该混合工作液液的配制方法是：将X μg的RNA（DEPC无菌水配置）加入至W μL DEPC无菌水配置的5%葡萄糖溶液，再加入Y μL的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂，充分混匀后室温静置20分钟，最终将上述制备好的工作液加入细胞培养装置；细胞培养装置中预先加入无血清、无双抗的培养液（也可采用含3%血清、无双抗的培养液），加入的培养液体积为[Z-(W+Y)/1000）mL。转染配方如表2和表3所示（表2以1 nM，RNA分子量为14 kDa为例，表3以1 nM，RNA分子量为60 kDa为例）。转染24-48小时后（中途无需换液，也可根据细胞种类于转染6小时后加入含血清培养基），采用适当的方法进行检测。RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂的推荐使用比例为质量体积比1:2（w/v，1 μg RNA使用2 μL BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂进行转染）。
   
  表2.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分推荐使用剂量

  细胞培养装置	W (μL)：RNA储备液稀释后的溶液体积	X ：加入的RNA的量，RNA终浓度为1nM	Y (μL)：加入的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂体积	Z (mL)：终体积
  96孔板	40	2.8 ng (0.2 pmol)	5.6×10-3	0.2
  24孔板	100	7.0 ng (0.5 pmol)	1.4×10-2	0.5
  12孔板	200	14 ng (1 pmol)	2.8×10-2	1
  6孔板	200	28 ng (2 pmol)	5.6×10-2	2
  100 mm培养皿	500	140 ng (10 pmol)	0.28	10

  注：表中配比为RNA终浓度为1nM时，1孔中细胞转染所需的量，使用时可依据不同RNA终浓度进行相应倍比调整
   
  表3.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分推荐使用剂量(大分子量RNA)

  细胞培养装置	W (μL)：RNA储备液稀释后的溶液体积	X ：加入的RNA的量，RNA终浓度为1 nM	Y (μL)：加入的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂体积	Z (mL)：终体积
  96孔板	40	12 ng (0.2 pmol)	2.4×10-2	0.2
  24孔板	100	30 ng (0.5 pmol)	0.06	0.5
  12孔板	200	60 ng (1 pmol)	0.12	1
  6孔板	200	120 ng (2 pmol)	0.24	2
  100 mm培养皿	500	600 ng (10 pmol)	1.2	10

  注：表中配比为RNA终浓度为1nM时，1孔中细胞转染所需的量，使用时可依据不同RNA终浓度进行相应倍比调整
   
  
   

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