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BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂

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货号: KX0110049

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  • ￥ 840.00 / 0.8ml
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产品基本信息

  • 产品货号 KX0110049
  • 产品名称 BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂
  • 类别 转染试剂
  • 运输及保存条件 常温运输，4℃保存，稳定保存期12个月。长期保存置于-20℃
  • 注意事项 注意事项
    1. 转染前细胞应处于对数生长期的良好状态，推荐细胞传代后12-24小时内转染，细胞密度控制在50%-70%；
    2. 使用高纯度的RNA也是转染成功的关键因素，在转染前确定RNA的含量和纯度，实验过程中使用DEPC处理过的耗材和试剂，避免RNase污染；另外RNA与转染试剂复合物制备时盐含量高会导致复合物形成时产生沉淀，因此应将RNA重悬于5%葡萄糖溶液（由无菌DEPC水配制）或DEPC水中，如下（4）中推荐的稀释液；
    3. RNA与转染试剂复合物应现配现用；配置后的RNA与转染试剂复合物应于1小时内用于细胞转染；
    4. 体外细胞转染时血清的影响：高浓度血清的存在会影响BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂与RNA形成复合物。因此推荐转染过程中使用无血清培养基，以达到复合物形成的最佳效果；如细胞对无血清条件完全不能耐受，则推荐转染过程使用不高于3%含量的血清；复合物进入细胞后(约需4-6小时)，血清的存在并不影响复合物的转染效果，因此转染4-6小时后可加入含血清培养基继续培养细胞；
    5. 体外细胞转染推荐稀释液： 5%葡萄糖溶液（w/v，用无菌DEPC水配制）； BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂试剂可用该稀释液稀释，稀释后的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂试剂置于4℃或-20℃保存，两周内稳定；
    6. 为了达到更好的转染效果，可根据实验需要优化RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂的配比，推荐优化比例范围为1:2~1:8（w/v, RNA: BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂）；
    7. 本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断和治疗。

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产品详情

试剂组分：
试剂盒组分 规格 保存
BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂 0.8ml 4℃保存
5%葡萄糖溶液（赠品）* 8ml 4℃保存
*备注：此处5%葡萄糖溶液（w/v，DEPC水配制）作为赠品免费提供。如需更大批量，可用无菌DEPC水自行配置。

产品描述
BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂是一种新型高效阳离子聚合物，其可与RNA (包括siRNA、miRNA)相互作用形成复合物将RNA递送至真核细胞内，具有转染效率高，细胞毒性小，生物相容性好等特点，尤其适合各种高通量细胞筛选实验，方便、快捷、高效。BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂通过内吞作用进入细胞后，表达“质子海绵效应”的特性，缓冲内体pH值，保护RNA不被降解，连续的质子内流也可引起溶酶体渗透肿胀和破裂，为RNA逃逸到细胞质提供了机制。

产品特点
1.转染效率高
2.细胞类型广
3.细胞安全性高






操作步骤
  1. 接种细胞：转染前18~24小时将细胞接种在孔板中，细胞密度以及培养液体积如表1所示：
表1.常用细胞培养装置中细胞接种量以及培养液体积推荐量
细胞培养装置 细胞接种数量 培养液体积 (mL)
96孔板 (0.5-0.8)×104 0.2
24孔板 (2.5-3)×104 0.5
12孔板 (1-1.5)×105 1
6孔板 (3-3.5)×105 2
100 mm培养皿 (0.8-1)×106 10
 
  1. 准备RNA-转染试剂复合物：
（转染配方比例如表2和表3所示。表2：以RNA的最终浓度1 nM，RNA分子量为14 kDa为例；表3：以1 nM，RNA分子量为60 kDa为例）。
  1. 使用W μL DEPC无菌水配置的5%葡萄糖溶液，将X μg的RNA（DEPC无菌水配置）稀释至所需终浓度。
注：根据细胞和目的基因的差异，RNA所需终浓度可能在1~50 nM之间，常见参考剂量20-30nM。更准确的数据可根据梯度实验测试，或查阅相关实验参考文献。
  1. 立即再加入Y μL的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂。
注：RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂的推荐使用比例为质量体积比1:2（w/v，1 μg RNA使用2 μL BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂进行转染）。
  1. 充分混匀后室温静置20分钟。
 
  1. 细胞转染：
1) 在形成复合物过程中，将步骤1准备好的细胞的培养基替换为无血清、无双抗的培养液（也可采用含3%血清、无双抗的培养液），加入的培养液体积为Z mL
2) 加入步骤2准备好的BioShuttle siRNA/miRNA体外转染试剂与RNA复合物。
3) 37 ℃，5% CO2培养箱培养。转染24-48小时后（中途无需换液，也可根据细胞种类于转染6小时后加入含血清培养基），采用适当的方法进行检测。
表2.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分使用剂量
细胞培养装置 培养液终体积(mL) X ：加入RNA的量。RNA分子量14kD，终浓度1nM为例 Y (μL)：加入转染试剂的体积 W (μL)：RNA-转染试剂复合物总体积 Z (mL)：加入的无血清培养基体积
96孔板 0.2 2.8 ng (0.2 pmol) 5.6×10-3 40 0.16
24孔板 0.5 7.0 ng (0.5 pmol) 1.4×10-2 100 0.4
12孔板 1 14 ng (1 pmol) 2.8×10-2 200 0.8
6孔板 2 28 ng (2 pmol) 5.6×10-2 200 1.8
100 mm培养皿 10 140 ng (10 pmol) 0.28 500 9.5
注：表中配比为RNA终浓度为1nM时，1孔中细胞转染所需的量，使用时请依据不同RNA终浓度进行相应倍比调整

表3.常用细胞培养装置中细胞转染时各组分使用剂量(大分子量RNA)
细胞培养装置 培养液终体积(mL) X ：加入RNA的量。RNA分子量60kD，终浓度1 nM为例 Y (μL)：加入转染试剂的体积 W (μL)：RNA-转染试剂复合物总体积 Z (mL)：加入的无血清培养基体积
96孔板 0.2 12 ng (0.2 pmol) 2.4×10-2 40 0.16
24孔板 0.5 30 ng (0.5 pmol) 0.06 100 0.4
12孔板 1 60 ng (1 pmol) 0.12 200 0.8
6孔板 2 120 ng (2 pmol) 0.24 200 1.8
100 mm培养皿 10 600 ng (10 pmol) 1.2 500 9.5
注：表中配比为RNA终浓度为1nM时，1孔中细胞转染所需的量，使用时请依据不同RNA终浓度进行相应倍比调整
 

文献引用 (1)

产品问答

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Q1: 所使用的RNA必须使用PAGE和HPLC纯化方式么？siRNA和miRNA还有其他纯化方式么？

Q2: siRNA和miRNA的纯化方式和mRNA纯化方式是否不同？

Q3: RNA和转染试剂复合物可以用其他试剂稀释吗？

Q4: 请问为什么需要使用葡萄糖溶液进行稀释？为了减少注射体积，可以不用葡萄糖稀释液吗？

Q5: 两款RNA转染试剂都可以做RNA和DNA共转么？

Q6: 【RNA体外转染试剂】和【RNA体内转染试剂】有什么区别？

Q7: 该转染试剂已测试细胞有哪些？

Q8: 所使用的RNA必须使用PAGE和HPLC纯化方式么？siRNA和miRNA还有其他纯化方式么？

Q9: siRNA和miRNA的纯化方式和mRNA纯化方式是否不同？

Q10: RNA和转染试剂复合物可以用其他试剂稀释吗？

Q11: 请问为什么需要使用葡萄糖溶液进行稀释？为了减少注射体积，可以不用葡萄糖稀释液吗？

Q12: 两款RNA转染试剂都可以做RNA和DNA共转么？

Q13: 【RNA体外转染试剂】和【RNA体内转染试剂】有什么区别？

Q14: 该转染试剂已测试细胞有哪些？

Q15: 咱们的转染试剂是GMP级别么

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