黑胶虫去除剂

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货号: BDAA0258

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产品基本信息

产品货号 BDAA0258
产品名称黑胶虫去除剂
类别细胞培养试剂

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产品详情

黑胶虫去除剂

产品简介

在细胞培养过程中，高倍显微镜下常见在原地进行布朗运动的黑色污染物，其形态不规则，初始呈现点状，随着培养时间的增加其形态可以转变为密集的小黑点。目前，这种成分不明的污染类型被称之为“黑胶虫”污染。黑胶虫可以在一段时间内与细胞共生，并减慢细胞增殖速度，并且这种污染不会因清洗细胞而减少，也不能被细胞培养用抗生素（青霉素、链霉素、庆大霉素、两性霉素等）及支原体清除剂清除。随着污染程度的加重，最终会导致细胞死亡。
与细菌污染不同的是，黑胶虫基本不会游离在培养基中，而是贴在培养板底部或细胞表面，无论多么严重的黑胶虫污染，培养基都不会出现浑浊的现象。这种明显区别于细菌和真菌污染的出现给研究人员在细胞培养过程中带来长期且影响巨大的困扰和损失。更为麻烦的是，黑胶虫污染一旦出现即很难消灭，即使及时丢弃了被污染的细胞，其他细胞也会在或短或长的时间后出现污染。本试剂可以有效去除细胞培养过程中的黑胶虫污染，且不会改变细胞本身的形态及增殖速率。黑胶虫清除后细胞可正常进行培养，也可以进行需要极低密度传代的实验（如克隆形成，建议在此类需要极低密度进行传代的实验时持续添加试剂B）。

使用方法
1.从培养箱中取出被黑胶虫污染的细胞，按照常规传代方法对细胞进行传代。建议传代比例为1:2（细胞密度高有利于黑胶虫去除，在去除黑胶虫后即可按正常比例传代）
2.传代时（细胞尚未贴壁）在完全培养基中加入试剂A（稀释比1:1000），十字交叉法混匀，放入细胞培养箱中培养。
3.细胞贴壁后（约6-12小时）镜下观察，黑胶虫应该较处理前有80%左右都被去除。更换新鲜培养基并同时加入试剂A（1:1000）和试剂B（1:1000）继续进行培养至细胞长满培养皿。
4.重复2-3步骤3次以上，即可完全去除细胞中的黑胶虫。
5.去除黑胶虫后，建议后续培养过程中在培养基中持续添加试剂B（按1:2000-1:5000的浓度添加），可以使细胞不再重复出现黑胶虫污染，保持良好的生长状态。
注意事项
1.细胞在被黑胶虫严重污染的状况下，不建议在添加黑胶虫去除剂后以较稀的密度传代或直接进行单克隆铺板，因为细胞密度太低会导致去除效果不好。建议在按照使用说明去除黑胶虫后，再在添加试剂B的基础上以正常比例传代或进行单克隆铺板。
2.试剂A不可长时间加入细胞培养基中，故在黑胶虫清除干净后，如需要确保细胞状态的持续良好，可在培养过程中持续添加试剂B但不建议继续添加试剂A。
3.试剂B在大部分细胞中（如HEK293T，HeLa，CHO，MCF7，小鼠胚胎干细胞，原代细胞等）可以直接在传代时添加，但在少部分细胞（如结直肠癌细胞系HCT116，DLD1等）中需在细胞贴壁后再添加，否则可能会造成细胞贴壁不牢。
4.本产品均需避光保存，故添加时也建议现加现用。如果将本产品直接添加进完全培养基中保存在4℃待用，建议将培养基避光保存。
5.本产品对支原体也有一定的清除效果（案例四），但支原体不是本产品的首要灭杀对象。
6.本产品只用于科学研究。
7.为了您的安全和健康，请穿实验服和佩戴手套使用本产品。

实验案例

案例一: AC16细胞（人源心肌细胞）在不同黑胶虫清除剂处理后的图片。
A: 对照组，不添加任何清除剂。黑胶虫计数：627个/视野。
B: H品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：94个/视野。
C: P品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：136个/视野。
D: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野1）。黑胶虫计数：25个/视野。
E: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野2）。黑胶虫计数：11个/视野。

案例二: HeLa细胞（人源宫颈癌细胞）在单克隆成型过程中持续用不同黑胶虫清除剂处理后的图片。
A: 对照组，不添加任何清除剂。黑胶虫计数：6827个/视野。
B: H品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：43个/视野。
C: P品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：71个/视野。
D: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野1）。黑胶虫计数：18个/视野。
E: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野2）。黑胶虫计数：5个/视野。

案例三: E14TG2a细胞（小鼠胚胎干细胞）在贴壁后用不同黑胶虫清除剂处理后的图片。
A: 对照组，不添加任何清除剂。黑胶虫计数：1847个/视野。
B: H品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：89个/视野。
C: P品牌黑胶虫清除剂处理后的细胞。黑胶虫计数：109个/视野。
D: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野1）。黑胶虫计数：32个/视野。
E: 黑胶虫去除剂处理后的细胞（视野2）。黑胶虫计数：67个/视野。

案例四: 黑胶虫去除剂对支原体污染的清除效果
取五种不同的细胞系，提取基因组并用支原体特异性检测引物进行PCR，扩增35个循环后进行凝胶电泳检测，结果如下图所示。

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