环磷酸腺苷(cAMP)ELISA检测试剂盒
1958年Sutherland发现了cAMP(Adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate,环磷酸腺苷),并因此获得了1971年诺贝尔生理与医学奖。1963年Ashman发现了cGMP(Guanosine 3’,5’-cyclic monophosphate,环磷酸鸟苷)。cAMP和cGMP都是小分子的环状核苷酸,以微量存在于动植物细胞和微生物中,被称其为细胞内的第二信使(激素为第一信使)。cAMP(或cGMP)由腺苷酸(或鸟苷酸)环化酶产生,被磷酸二酯酶降解,因此激活腺苷酸(或鸟苷酸)环化酶或者抑制磷酸二酯酶,可以提高细胞内cAMP(或cGMP)的含量。研究发现,cAMP(或cGMP)特异性磷酸二酯酶的抑制剂可用于人类疾病的治疗。如:增强β肾上腺素能受体(cAMP的封闭剂)已被用于心率失调、高血压、心肌梗死等心脏疾病;cAMP特异性磷酸二酯酶2/4的抑制剂正在进行认知增强方面的临床测试;而cGMP特异性磷酸二酯酶类型5可用于治疗ED等疾病。在药物筛选研究中,寻找合适的腺苷酸(或鸟苷酸)环化酶激活剂或磷酸二酯酶抑制剂,需要一个高敏感度、特异性的cAMP(或cGMP)浓度检测方法。
本ELISA试剂盒原理是HRP-cAMP和游离cAMP的竞争性争夺有限的cAMP单抗(cAMP mAb)的抗原结合位点。由于HRP-cAMP含量是恒定的,而游离cAMP(样品中的cAMP)含量是不定的。cAMP单抗与样品中游离cAMP结合后,再结合HRP-cAMP的能力就与游离cAMP的含量成反比。事先已经包被在孔板上的山羊抗小鼠IgG,将上述抗原抗体复合物抓取下来,测出结合在孔板上的HRP-AMP的含量,就能计算出样品中cAMP的含量。本ELISA试剂盒IC50(50% B/B0)约12 pmol/mL,检测限(90% B/B0)约0.15 pmol/mL。
竞争型ELISA标准曲线制作方法(Curve Expert软件)