用途:用于贴壁细胞的瞬时转染和稳定细胞系构建;
运输保存:QuickPEI转染试剂建议常温运输;无菌取用;-20 ºC保存,有效期24个月;-80 ºC可长期保存;若冷冻保存,解冻后于2~8ºC保存(可保存6个月),避免反复冻融,影响转染效果;
过滤条件:本产品经经 0.22µm滤膜过滤除菌。
产品描述
QuickPEI转染试剂是一种化合物转染试剂,不含动物源性成分,是一种功能强大的瞬时转染试剂。为贴壁细胞提供高效且可重复的基因递送方案。在HEK293和CHO表达系统中,QuickPEI在大范围内提供均一的高基因表达(96孔板至100L生物反应器)。特别适用于自动预制或手动 HTS(高通量筛选)转化方案,可用于抗体表达,各种病毒包装如AAV,慢病毒,腺病毒,及重组蛋白的试剂。
贴壁细胞转染使用方法(以6孔板为例):
1.
接种细胞:为了提高转染效率,建议转染前24小时接种细胞(如293细胞)到6孔细胞板中,每孔5~10×10
5细胞,3ml完全培养基,转染时细胞密度在70%~80%为宜。
2.
准备DNA-PEI复合物:按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物:
1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清稀释液(如DMEM等) 稀释2 μg目的DNA,充分混匀成DNA稀释液。
【注】无血清稀释液建议采用Opti-MEM、DMEM或ddH
2O,使用Opti-MEM更佳。
2)立刻向100 μL的DNA稀释液中加入6 μL的QuickPEI转染试剂,轻轻混匀。DNA:PEI(质量体积比, µg:µl) 比例可以按需调整
3)在室温下孵育10~15 min,形成DNA-阳离子核酸转染试剂复合物。
3.
转染细胞:
1)在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。
2)将全部DNA-PEI 复合物加入到细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。
3)37 ℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快24 h即可检测到转染基因的表达。请自行确定适合检测时间。
4.
稳转筛选(可选)
转染24 h后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37 ℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
附表1 QuickPEI用量一览表(以DNA:PEI比例1:3为例,仅供参考,建议优化)
培养器皿 |
表面积(cm2) |
培养基用量(ml) |
DNA用量(μg)/DMEM (μl) |
转染试剂用量(μl)/DMEM (μl) 用量(μl) |
96孔板 |
0.4 |
0.2 |
0.1/25 |
0.3/25 |
24孔板 |
2 |
1 |
0.5/50 |
1.5/50 |
12孔板 |
4 |
2 |
1/50 |
3/50 |
6孔板 |
9 |
3 |
2/100 |
6/100 |
35mm培养皿 |
9 |
3 |
2/100 |
6/100 |
60mm培养皿 |
21 |
6 |
4/200 |
12/200 |
100mm培养皿 |
55 |
15 |
12/400 |
36/400 |
25cm2培养瓶 |
25 |
7 |
6/200 |
7.5/200 |
75cm2培养瓶 |
75 |
20 |
18/400 |
54/400 |
175cm2培养瓶 |
175 |
50 |
40/1000 |
120/1000 |
部分转染效果图:
贴壁293T细胞转染效果(DNA:PEI=1 µg:3µl)
不同DNA:PEI比例293T细胞转染测试结果:EGFP阳性质粒,实验24孔板,DNA:QuickPEI, 1:3,1:4,1:5 (DNA质量 PEI体积比µg:µl)
QuickPEI转染包装AAV病毒侵染293T细胞