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概述
胰酶(Trypsin-EDTA)是最常用的细胞分离试剂,为223个氨基酸组成的单链多肽,是胰蛋白酶原(Trypsinogen)在Lys6和Ile7之间切除氨基N末端6肽(Hexapeptide)得到的。胰酶属于丝氨酸水解酶家族,活化位点包括His46和Ser183,胰酶裂解Lysine的羧基末端和Arginine的氨基末端,水解效率在任何一端存在酸性氨基酸时降低,而当Proline存在于裂解位点的羧基末端一侧时,水解反应不能发生。胰酶的最佳使用pH值为7.2-9.2。
成分
货号 |
BDXB0020 |
胰酶 |
0.25% |
EDTA·4Na |
0.02g/L |
酚红 |
N/A |
操作步骤
注:使用前将胰酶解冻,保存在4℃,建议不要反复冻融。
1. 移除细胞培养瓶/皿中的培养液,用适量不含钙和镁离子的PBS或D-PBS快速冲洗细胞1-2次,完全移除培养瓶/皿中的液体;
2. 加入适量(250px培养皿加入0.5ml)胰酶,转动培养瓶/皿,让细胞和胰酶充分接触;
3. 置于37℃培养箱中,孵育1-5min(不同细胞类型有所不同);
4. 轻轻磕击培养瓶/皿,在倒置显微镜下观察,大多数细胞荧光橙悬浮状态;
5. 加入培养基,用移液管吹打5-10次,按照实验要求将细胞种植到新的培养瓶/皿中。
注意事项
1. 胰酶对细胞有损伤,应尽量缩短孵育时间;
2. 如果细胞培养在不含血清的培养基中,胰酶消化完毕,加入PBS,500×g离心10分钟,移除PBS,将细胞重悬于所用的培养基中。