产品基本信息

• 产品货号 BF06231
• 产品名称 RIPA裂解液(高强度,无抑制剂)
• 类别 WB、IHC、ELISA相关试剂
• 推荐应用 WB
• 产品描述  
  产品介绍
   
            RIPA 裂解液（高强度,无抑制剂）可用于裂解细胞/组织，有效提取细胞质、细胞膜及 细胞核蛋白，获得的蛋白样品可用于常规的蛋白分析，如 Western Blot、IP 等。本产品的主 要成分为 100 mM Tris-HCL(pH 8.0)、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1% deoxycholic acid、 0.1% SDS 等。
  以贴壁细胞（6 孔板）举例，每孔 200 μL RIPA 裂解液，100 mL 试剂大概可以用于 500 个孔的染色。
   
  操作步骤
   
  1. 取适当量的 RIPA 裂解液，在使用前数分钟根据需要加入蛋白酶或磷酸酶抑制剂， 并在冰上预冷。
      注：蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂需另行购买。
  2. 裂解细胞（在冰上操作）
  （1）对于细胞样品：
  贴壁细胞：
  a. 去除培养基，用预冷的1× PBS清洗2遍。
  b. 去上清，加入200 μL预冷后的RIPA裂解液（6孔板），混匀，冰浴5 min。
  c. 充分裂解后，收集裂解液。
  d. 14000 xg离心5 min，取上清用于进一步实验。
  悬浮细胞：
  a. 收集细胞，1500 rpm离心3 min。2 / 2
  b. 去上清，并用预冷的1× PBS清洗，1500 rpm离心3 min，重复2遍。
  c. 去上清，加入200 μL预冷后的RIPA裂解液（1 × 106 cells/管），混匀，冰浴5 min。
  d. 充分裂解后，14000 xg离心5 min，取上清用于进一步实验。
  （2）对于组织样品：
  a. 将组织剪成小块，并称重。
  b. 加入200 μL预冷后的RIPA裂解液（20 mg组织），用匀浆器进行匀浆。
  c. 冰浴5 min，充分裂解细胞。
  d. 14000 xg离心5 min，取上清用于进一步实验。
   
  注意事项
   
  1. RIPA 裂解液（高强度,无抑制剂）含有较高浓度的去垢剂，因此与 Bradford 法测定蛋白 浓度不兼容。
  2. RIPA 裂解液（高强度,无抑制剂）不含有蛋白酶或其他酶的抑制剂，使用前请根据实验 需求加入酶抑制剂，以防蛋白降解。
  3. 裂解过程需在冰上进行。
  4. 以 Hela 细胞为例，1 × 106 cells 需要 200 μL 预冷的 RIPA 裂解液，该裂解液的量相对较 充足，在有限细胞的情况下，如需提高蛋白浓度，可适当减少裂解液的量。
  5. 裂解产物中如若出现的一小团透明胶状物，属于正常现象，是含有基因组 DNA 的复合 物。
   
   

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