产品介绍
彩色预染蛋白Marker(10-250KD)(三色)是一种包含三种颜色预染型蛋白的混合物。产品由11种不同分子量大小的高纯度重组蛋白预混制备而成,涵盖10-250 kDa的分子量范围(10,15,20,25,35,40,50,70,100,150,250 kDa),其中25 kDa是绿色条带,70 kDa是橙色条带,其余9种蛋白为蓝色条带(见图一)。本产品作为Western Blot或SDS-PAGE的蛋白分子量标准品,用于指示SDS-PAGE的电泳蛋白分离情况,亦用于评估Western Blot的转膜效果。产品已预混loading buffer,不需要加热、稀释或添加还原剂,即可直接点样至蛋白凝胶孔内。
产品组成
缓冲液成分:62.5 mM Tris-HCl (pH 7.5 25°C), 1 mM EDTA, 2%(w/v) SDS, 10 mM DTT, 33%(v/v) glycerol。
使用方法
1.从储存冰箱中取出产品,置于室温下进行解冻并轻柔混匀。无需加热煮沸。
2.直接吸取适宜体积的产品点样至蛋白凝胶的相应孔内。推荐点样量如下:
0.75-1.0 mm厚度:3 μL(15孔),5 μL(10孔);
1.5 mm厚度:7 μL(15孔),10 μL(10孔);
注:可以根据实验情况进行适当调整点样量。
注意事项
1.产品请勿加热煮沸。
2.本产品不含蛋白质his标签。
3.本产品含有SDS,不适合用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4.在不同的凝胶缓冲体系中,预染蛋白质的迁移率会有所差别。
5.在低浓度凝胶中,低分子量条带会与溴酚蓝染料指示条带迁移速度接近而无法分离。可以先在该缓冲体系中用非预染蛋白分子量标准进行标定,可以大致确定蛋白质的分子量。
6.一般电泳运行至溴酚蓝指示条带基本上到达凝胶底部或预染分子量标准分离展开时即可结束电泳。
7.由于银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高10倍以上,使用本产品用于银染试验时适当减少产品的使用量。
8.该产品适用的Western Blot印迹膜材质包括聚偏二氟乙烯(PVDF)、尼龙(Nylon)和硝酸纤维素(NC)。
9.当转印分子量大于100 kDa的蛋白时,适当延长转印时间或提高电流(恒流电转)/电压(恒压电转),可以提高大分子量条带的转印效果。若仍不能有较好的转印效果,可以适当减少电转缓冲液的甲醇使用量并加入不高于0.02-0.04%的SDS。
图一. 本产品在4-20%浓度下gradient gel电泳效果