产品介绍
彩色预染蛋白 Marker(25-400 kD )(四色) 是一种包含四种颜色预染型蛋白的混合物。 产品由 10 种不同分子量大小的高纯度重组蛋白预混制备而成,涵盖 25-400 kDa 的分子量范 围(25,45,72,100,130,160,200,250,300,400 kDa ),其中 25 kDa 是绿色条带, 72 kDa 是橙色条带,400 kDa 是红色条带,其余 7 种蛋白为蓝色条带(见图一)。本产品作 为 Western Blot 或 SDS-PAGE 的蛋白分子量标准品,用于指示 SDS-PAGE 的电泳蛋白分离 情况,亦用于评估 Western Blot 的转膜效果 。本产品在不同胶浓度以及不同的电泳缓冲液中 迁移情况见图二。产品已预混 loading buffer,不需要加热、稀释或添加还原剂,即可直接点 样至蛋白凝胶孔内。
产品组成
缓冲液成分:62.5 mM Tris-H3PO 4 (pH7.5),2 mM EDTA,2% (W/V) SDS,33% (W/V) Glycerol, 10 mM DTT。
使用方法
1.从储存冰箱中取出产品,置于室温下进行解冻并轻柔混匀。无需加热煮沸。
2.直接吸取适宜体积的产品点样至蛋白凝胶的相应孔内。推荐点样量如下:
0.75-1.0 mm 厚度:8 μL (15孔),10 μL(10孔); 1.5 mm 厚度:10 μL(15 孔),12 μL(10孔);
注:可以根据实验情况进行适当调整点样量。
注意事项
1.产品请勿加热煮沸。
2.本产品含蛋白质 his 标签。
3.本产品含有 SDS ,不适合用于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4.在不同的凝胶缓冲体系中,预染蛋白质的迁移率会有所差别。
5.在低浓度凝胶中,低分子量条带会与溴酚蓝染料指示条带迁移速度接近而无法分离。可 以先在该缓冲体系中用非预染蛋白分子量标准进行标定,可以大致确定蛋白质的分子量。
6.一 般电 泳运行至溴酚蓝指示 条带基 本上到 达凝胶 底部或 预染 分子 量标准分离展开时即 可结束电泳。
7.由于银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高10 倍以上,使用本产品用于银染试验时适当减少 产品的使用量。
8.该产品适用的 Western Blot 印迹膜材质包括聚偏二氟乙烯(PVDF)、尼龙(Nylon )和 硝酸纤维素(NC)。
9.当转印分子量大于100 kDa 的蛋白时,适当延长转印时间或提高电流(恒流电转)/电压 (恒压电转 ),可以提高大分子量条带的转印效果。若仍不能有较好的转印效果,可以 适当减少电转缓冲液的甲醇使用量并加入不高于0.02-0.04%的 SDS
图一. 本产品在7%浓度 下 Tris-Glycine 电泳和转印效果 图二. 本产品在不同胶浓度以及在同的电泳缓冲液中迁移情况