试剂组分：
| 组分名称 |
货号 |
| BDAG0052-1ml |
BDAG0052-5ml |
BDAG0052-10ml |
| 2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix |
1 mL |
5 mL |
10 mL |
| Buffer TLB03 |
20 mL |
100 mL |
2,000 mL |
| ROX ReferenceⅠ (50×) * |
40 µL |
200 µL |
400 µL |
| ROX ReferenceⅡ (50×) * |
40 µL |
200 µL |
400 µL |
*备注：ROX Reference为另行选配试剂，本产品未含；针对不同型号Real-Time PCR仪使用方法如下：
1. ROX Reference Ⅰ(50×)为高浓度ROX，适用于如下型号Real-Time PCR仪：
- Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific)；
- Applied Biosystems 7900 Real-Time PCR System(Thermo Fisher Scientific)；
- Step One Plus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
2. ROX Reference Ⅱ (50×)为低浓度ROX，适用于如下型号Real-Time PCR仪：
- AppliedBiosystems 7500 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)；
- AppliedBiosystems 7500 FAST Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
3. 当使用于如下型号Real Time PCR扩增仪时，无需加入ROX Reference：
-Roche、Bio-Rad、TaKaRa、宏石、雅睿、博日、天隆等其它无需加入ROX校准染料的Real-Time PCR仪。
产品描述
本试剂盒包含小鼠组织DNA快速释放试剂和TaqMan qPCR扩增试剂，可针对小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织快速释放基因组DNA，而无需进行核酸提取，释放的产物可直接进行qPCR扩增，可快速对小鼠进行基因分型。
试剂盒中的2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix为 2×浓度的预混试剂，包含热启动DNA聚合酶、Mg2+、dNTP以及优化的缓冲液，操作简单并减少了污染的可能性，可实现高通量检测。只需向反应体系加入引物探针和模板即可进行qPCR反应。体系中加入的保护剂使得Mix反复冻融后仍保持较高的活性。
产品特点
1.试剂盒无需对小鼠组织进行核酸提取或纯化，直接进行qPCR反应，省时省力；
2.Buffer TLB03可10min完成对小鼠组织的裂解释放基因组DNA。
实验流程
1.样本制备
1)剪取1-5mm的鼠尾（或者3-5mm直径的鼠耳、2-3个小鼠脚趾）。
2)分别向样品中加入200µL Buffer TLB03，涡旋混匀后将样品置于95℃条件下加热10min。
3)将以上产物进行涡旋振荡充分混匀后，于12000rpm离心2-5min，取上清即可进行PCR反应。
2.扩增体系和条件
1)反应体系制备
| 组分 |
体积 (µL per sample) |
终浓度 |
| Mix A |
Mix B |
2×Mouse Tissue Direct TaqMan qPCR Mix
Forward Primer (10 μM)
Reverse Primer (10 μM)
Probe (10 μM)
Template*
PCR Grade H2O |
10
0.5 0.5
0.4
2
To 20 |
25
1.0 1.0
0.4
5
To 50 |
1×
0.25 μM
0.25 μM
0.2 μM
/
/ |
| 总体积/rxn |
20 |
50 |
|
*备注：DNA模板加入量建议为反应总体积的10-20%。
2)反应程序
| Step |
Temp. |
Time |
Cycle |
| Initial Denaturation |
95℃ |
5 min |
1 Cycle |
Denaturation
Annealing / Extension / Data Collection |
95℃
60℃ |
15 sec
30 sec |
35~45 Cycles |
应用实例
使用本试剂盒对基因编辑鼠尾进行qPCR检测，均能良好的完成扩增。
注意事项
1.qPCR Mix解冻需要在冰上进行，并避免反复冻融；
2.PCR反应配制过程需在冰上进行，各成份加毕后请短暂涡旋混匀并离心；
3.请避免核酸酶污染样本，否则可能造成扩增反应出现困难的情况；
4.请仔细阅读本说明，严格按照操作流程和推荐用量使用本产品；
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