*备注：ROX Reference 为另行选配试剂，本产品未含；不同型号 Real-Time PCR 仪，使用方法如下：
1) ROX Reference Ⅰ (50×)为高浓度 ROX，适用于如下型号 Real Time PCR 仪：
- Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)；
- Applied Biosystems 7900 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)；
- Step One Plus Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
2) ROX Reference Ⅱ (50×)为低浓度 ROX， 适用于如下型号 Real Time PCR 仪：
- Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)；
- Applied Biosystems 7500 FAST Real-Time PCR System (Thermo Fisher Scientific)。
3) 当使用于如下型号 Real Time PCR 扩增仪时，无需加入 ROX Reference：
- Roche、Bio-Rad、TaKaRa 等其它无需加入 ROX 校准染料的 Real-Time PCR 仪。
产品描述：
本产品可针对血卡或血斑样本，无需进行核酸提取，进行 Taqman Probe 法直接 qPCR 反应，用于 SNP 基因分型检测的专用试剂。
用试剂盒中专门开发的 Buffer BCL02 组分，对血卡样本进行简单预处理后直接进行 qPCR 扩增反应， SNP 分型效果可媲美以核酸提取后的高纯 DNA 产物作为模板的反应效果。
产品中使用了经过定向改造、并进行了抗体封闭的直扩型热启动聚合酶(Hot-Start DNA Polymerase)，配 合条件优化的热启动 qPCR 专用缓冲体系，对血液样本中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性，可有效避免类似于非热启动型聚合酶导致的非特异性扩增反应，从而提升 PCR 扩增效率。同时也能够针对不同 GC含量的基因完成理想扩增，获得高灵敏度的 qPCR 检测结果。
产品特点
1. 无需核酸提取或者纯化，直接对原始血卡样本进行 SNP Genotyping qPCR 反应，省时省力；
2. 配合专门开发的高性能样本预处理组分 Buffer BCL02，直接 qPCR 反应效果可媲美以高纯 DNA 提取产物作为模板的反应效果；
3. 使用了抗体封闭的突变型聚合酶，可以进行 Hot Start 法 PCR 反应，与特别开发的 Buffer 系统相结合，具有高扩增效率、高扩增灵敏度的特点；
4. 可针对高 GC 含量片段进行有效扩增，扩增能力强。
扩增体系和条件
1. 样本前处理
1) 向 0.2 mL EP 管（或 96 孔 PCR 板）中加入 50 µL Buffer BCL02；
2) 用剪刀（或者打孔器）剪取 1~2 片 2 mm2尺寸的干血片，加入到 Buffer BCL02 中，瞬离确保干血片完 全浸入到液体中；
3) 将EP 管于95℃下加热5min后，置于平板离心机4000g离心2min（或台式离心机12,000RPM 离心2min），可直接吸取上清液作为 PCR 反应模板使用。
2.反应体系构建
*备注：
0.9 μM 终浓度的引物(Primer)和 0.2 μM 终浓度探针(Probe)，可满足大部分的实验要求，用户亦可根据经验对 Prime 和 Probe 浓度进行调整。
3.反应程序
应用实例
使用本试剂盒，对批量血卡样本进行处理后，使用直接 qPCR 方法对两个位点（rs1801131 和 rs1447295）进行 SNP 基因分型，实验结果显示可以成功分型，且 cluster 集中。
注意事项
1. Master Mix 使用前上下轻柔颠倒数次，确保各试剂成份完全混匀，并短暂离心收集试剂至容器底部，
试剂如未充分混匀可能导致反应性能下降；
2. Master Mix 置于 4℃的保存时间不应超过 1 周，长期保存置于-20℃；
3. 配制 PCR 反应 Mix，各成份依次加入后需涡旋混匀并进行短暂离心；
4. 请避免核酸酶污染样本，否则可能造成扩增反应出现困难的情况；
5. ROX Reference 对光敏感，应避免强光照射；
6. 本产品仅供科学研究使用。
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