产品基本信息

• 产品货号 BDAG0025
• 产品名称 快速植物直扩PCR试剂盒Fast Plant Direct PCR Kit（With Dye）
• 类别 分子生物试剂
• 产品描述
    
  
  产品描述：
   
           本产品为一款可针对不同物种植物叶片、种子等样本进行直接 PCR 扩增的试剂盒，免去了繁琐的核酸提取纯化过程， 可用于植物转基因检测及植物基因分型。试剂盒中使用了经过定向改造的直扩型 DNA Polymerase，对植物样本中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性，并保持较高的灵敏度和特异性。试剂盒中独特的 Lysis Buffer 可快速裂解各种类型植物组织，释放出基因组 DNA，裂解产物可直接作为 PCR 反应模 板使用。
           本产品为一种 2×浓度的预混试剂， 操作简单并减少了污染的可能性，可实现高通量检测。2×预混试剂中包含了 PCR 反应所需要的 DNA 聚合酶、 dNTP、 Mg2+、缓冲液和增强剂等成分，只需要向其中加入引物和模板即可进行 PCR 反应，同时包含电泳 Loading Buffer 以方便在 PCR 完成后直接进行电泳检测。
           针对多糖、多酚类植物样本，若本产品得不到理想扩增效果，可选用专门针对多糖、多酚植物样本的直扩试剂盒——快速植物直扩 Plus PCR 试剂盒。
  
  产品特点
   
  1. 无需进行核酸提取或纯化，直接对样本进行 PCR 扩增反应；
  2. 产品中含有 Loading Buffer ，PCR 产物可直接进行电泳检测；
  3. 扩增速度可以达到 30sec/kb，大大缩短检测时间
  4. 扩增产物中 3’端加“A”碱基并纯化后可直接用于 TA 克隆。
   
  实验流程
   
  一、样本制备
   
  1. 植物叶片样品制备
   
  可选择如下方式之一进行样本制备：
  1) 组织研磨法
  使用组织研磨仪研磨：剪取 3-5 mm 尺寸的新鲜幼嫩的叶片于深孔板(或 EP 管)中，向深孔板(EP 管)中加入 150-200µL Buffer RLB18，加入两颗钢珠(自备)，盖上硅胶盖(或 EP 管盖)，置于组织研磨仪上研磨 1-2 min。
  然后，置于平板离心机上于 4,000×RPM 下离心 1-2 min (建议 4℃下进行离心)，离心后上清液可直接作为 PCR反应模板使用。
           使用研钵研磨：剪取 3-5 mm 尺寸的新鲜幼嫩的叶片于研钵中，向其中加入 200 µL Buffer RLB18，用 研磨棒充分磨碎后置于离心机上于 12,000×RPM 离心 1-2 min（建议 4℃下进行离心），离心后上清液可直接作为 PCR 反应模板使用。
  
                                                                                                                                                           
   
  2) 加热裂解法
            剪取 2-3 mm 尺寸新鲜幼嫩的叶片于 200 µL EP 管(或 96 孔 PCR 板)中， 向 EP 管(或 PCR 板)中加入 50µL Buffer RLB18 (Buffer RLB18 务必淹没叶片) ，盖上管盖，在烘箱、水浴锅或者 PCR 仪上于 95℃加热处理 5-10 min，然后置于台式离心机上于 12,000×RPM 下离心 1-2 min(或平板离心机上于 3,000 ×RPM 离心 1-2min)，建议 4 下进行离心，离心后上清液可直接作为 PCR 反应模板使用。
   
  
  
  样本制备注意事项：
  a) 请务必参照示意图所示尺寸剪取叶片用量，并尽量不要取到叶脉；
  b) 为避免交叉污染，减取样品的工具每次取样后需洗刷后方可进行下一样品的取样；
  c) 有条件的情况下建议优先采用组织研磨法进行样本制备，使用组织研磨仪 时预先摸索破碎条件，包括转速/频率和研磨时间，研磨后看不到大块叶片即为研磨成功；
  d) 样本如需长期保存，请将上清液（吸取上清是尽量不要吸取到底部的沉淀）置于-20℃保存，短时间保存(<1 hr)可置于 4℃放置。
   
  2. 植物种子样品制备
   
  1) 组织研磨法
            参照表 1 建议的用量， 将植物种子加入到 Buffer RLB18 中进行充分研磨，然后置于离心机上于12,000×RPM 下离心 1-2 min，上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。
  
  
   
  表 1 植物种子样本及 Buffer RLB18 用量建议
            对于需要进行萌发实验的种子，切取 5-10mg 组织（切勿取到种胚），置于 150-200 µL Buffer RLB18中，充分研磨后置于离心机上于 12,000×RPM 下离心 1-2 min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。
   
  2) 加热裂解法
            参照表 1 建议的用量，将植物种子加入到 Buffer RLB18 中，置于 95℃处理 10-15 min(针对较难裂解的样本可适当延长加热处理时间) ，然后于 12,000×RPM 下离心 1-2 min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。
            对于需要进行萌发实验的种子，切取 5-10mg 组织（切勿取到种胚），置于 150-200 µL Buffer RLB18中，置于 95℃处理 10-15min(针对较难裂解的样本可适当延长加热处理时间)，加热结束后于 12,000×RPM下离心 1-2min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。
  
  二、扩增体系和条件
   
  1. 反应体系制备
  
  
   
  *: DNA 模板加入量建议为反应总体积的 10-20%
  2. 反应程序
  
  
   
  *: Extension 延伸速度 15-30sec/kb。
  3. 检测
             直接吸取 10µL PCR 产物于 1-1.5%的琼脂糖胶上进行电泳检测。
  
  
   
  应用实例
   
             使用本试剂盒对玉米、大豆、 黄瓜、小麦、生菜、田菁等物种的不同叶片进行直接 PCR 扩增实验， 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示：
  35-40cycles样本制备方法：研磨法
  
  
  
  注意事项
   
  1. 产品解冻需要在冰上进行，并避免反复冻融；
  2. 使用前上下轻柔颠倒试剂瓶数次，确保各试剂成份完全混匀，未混匀试剂反应性能会有所下降；
  3. PCR 反应配制过程需在冰上进行，各成份加毕后请短暂涡旋混匀并离心；
  4. 请仔细阅读本说明，严格按照操作流程和推荐用量使用本产品；
  5. 本产品仅供科学研究使用，不可用于临床诊断。  

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产品详情

  

产品描述：
 

         本产品为一款可针对不同物种植物叶片、种子等样本进行直接 PCR 扩增的试剂盒，免去了繁琐的核酸提取纯化过程， 可用于植物转基因检测及植物基因分型。试剂盒中使用了经过定向改造的直扩型 DNA Polymerase，对植物样本中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性，并保持较高的灵敏度和特异性。试剂盒中独特的 Lysis Buffer 可快速裂解各种类型植物组织，释放出基因组 DNA，裂解产物可直接作为 PCR 反应模 板使用。

         本产品为一种 2×浓度的预混试剂， 操作简单并减少了污染的可能性，可实现高通量检测。2×预混试剂中包含了 PCR 反应所需要的 DNA 聚合酶、 dNTP、 Mg2+、缓冲液和增强剂等成分，只需要向其中加入引物和模板即可进行 PCR 反应，同时包含电泳 Loading Buffer 以方便在 PCR 完成后直接进行电泳检测。

         针对多糖、多酚类植物样本，若本产品得不到理想扩增效果，可选用专门针对多糖、多酚植物样本的直扩试剂盒——快速植物直扩 Plus PCR 试剂盒。

产品特点
 

1. 无需进行核酸提取或纯化，直接对样本进行 PCR 扩增反应；

2. 产品中含有 Loading Buffer ，PCR 产物可直接进行电泳检测；

3. 扩增速度可以达到 30sec/kb，大大缩短检测时间
4. 扩增产物中 3’端加“A”碱基并纯化后可直接用于 TA 克隆。
 

实验流程
 

一、样本制备
 

1. 植物叶片样品制备
 

可选择如下方式之一进行样本制备：

1) 组织研磨法

使用组织研磨仪研磨：剪取 3-5 mm 尺寸的新鲜幼嫩的叶片于深孔板(或 EP 管)中，向深孔板(EP 管)中加入 150-200µL Buffer RLB18，加入两颗钢珠(自备)，盖上硅胶盖(或 EP 管盖)，置于组织研磨仪上研磨 1-2 min。

然后，置于平板离心机上于 4,000×RPM 下离心 1-2 min (建议 4℃下进行离心)，离心后上清液可直接作为 PCR反应模板使用。

         使用研钵研磨：剪取 3-5 mm 尺寸的新鲜幼嫩的叶片于研钵中，向其中加入 200 µL Buffer RLB18，用 研磨棒充分磨碎后置于离心机上于 12,000×RPM 离心 1-2 min（建议 4℃下进行离心），离心后上清液可直接作为 PCR 反应模板使用。

                                                                                                                                                         

 

2) 加热裂解法

          剪取 2-3 mm 尺寸新鲜幼嫩的叶片于 200 µL EP 管(或 96 孔 PCR 板)中， 向 EP 管(或 PCR 板)中加入 50µL Buffer RLB18 (Buffer RLB18 务必淹没叶片) ，盖上管盖，在烘箱、水浴锅或者 PCR 仪上于 95℃加热处理 5-10 min，然后置于台式离心机上于 12,000×RPM 下离心 1-2 min(或平板离心机上于 3,000 ×RPM 离心 1-2min)，建议 4 下进行离心，离心后上清液可直接作为 PCR 反应模板使用。

 

样本制备注意事项：

a) 请务必参照示意图所示尺寸剪取叶片用量，并尽量不要取到叶脉；

b) 为避免交叉污染，减取样品的工具每次取样后需洗刷后方可进行下一样品的取样；

c) 有条件的情况下建议优先采用组织研磨法进行样本制备，使用组织研磨仪 时预先摸索破碎条件，包括转速/频率和研磨时间，研磨后看不到大块叶片即为研磨成功；
d) 样本如需长期保存，请将上清液（吸取上清是尽量不要吸取到底部的沉淀）置于-20℃保存，短时间保存(<1 hr)可置于 4℃放置。

 

2. 植物种子样品制备
 

1) 组织研磨法

          参照表 1 建议的用量， 将植物种子加入到 Buffer RLB18 中进行充分研磨，然后置于离心机上于12,000×RPM 下离心 1-2 min，上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。


 

表 1 植物种子样本及 Buffer RLB18 用量建议

          对于需要进行萌发实验的种子，切取 5-10mg 组织（切勿取到种胚），置于 150-200 µL Buffer RLB18中，充分研磨后置于离心机上于 12,000×RPM 下离心 1-2 min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。
 

2) 加热裂解法

          参照表 1 建议的用量，将植物种子加入到 Buffer RLB18 中，置于 95℃处理 10-15 min(针对较难裂解的样本可适当延长加热处理时间) ，然后于 12,000×RPM 下离心 1-2 min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。

          对于需要进行萌发实验的种子，切取 5-10mg 组织（切勿取到种胚），置于 150-200 µL Buffer RLB18中，置于 95℃处理 10-15min(针对较难裂解的样本可适当延长加热处理时间)，加热结束后于 12,000×RPM下离心 1-2min，所得上清液即可直接作为 PCR 反应模板使用。

二、扩增体系和条件
 

1. 反应体系制备

 

*: DNA 模板加入量建议为反应总体积的 10-20%

2. 反应程序

 

*: Extension 延伸速度 15-30sec/kb。

3. 检测

           直接吸取 10µL PCR 产物于 1-1.5%的琼脂糖胶上进行电泳检测。


 

应用实例
 

           使用本试剂盒对玉米、大豆、 黄瓜、小麦、生菜、田菁等物种的不同叶片进行直接 PCR 扩增实验， 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示：

35-40cycles样本制备方法：研磨法



注意事项
 

1. 产品解冻需要在冰上进行，并避免反复冻融；

2. 使用前上下轻柔颠倒试剂瓶数次，确保各试剂成份完全混匀，未混匀试剂反应性能会有所下降；

3. PCR 反应配制过程需在冰上进行，各成份加毕后请短暂涡旋混匀并离心；

4. 请仔细阅读本说明，严格按照操作流程和推荐用量使用本产品；

5. 本产品仅供科学研究使用，不可用于临床诊断。