项目 | 性能 |
基质 | 4%琼脂糖微球 |
配体 | Anti-c-Myc 人单克隆抗体 |
结合能力 | ≈1 mg c-Myc 标签蛋白/ml 介质 |
粒径 (μm) | 45-165 |
最大流速 | 0.1 MPa, 1 bar |
储存缓冲液 | 1× PBS(含防腐剂) |
储存温度 | 2-8℃ |
问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
流穿中有目的蛋白 | 填料过载 | 减少上样体积或增加填料体积。 |
结合时间太短 | 延长样品和填料的结合时间。可过夜孵育。 | |
标签未暴露 | 可以加入低浓度的变性剂,上样前透析。 | |
溶液中试剂不兼容 | 样品上样前进行透析。 | |
洗脱组分中没有目的蛋白 | 目的蛋白不稳定 | 使用新配制的样品。 低温操作。 细胞裂解液中加入蛋白酶抑制剂。 |
样品中无标签融合蛋白 | 纯化前Western检测是否有c-Myc标签蛋白 | |
目的蛋白表达量太低 | 优化蛋白表达量。 增加上样量,减少NaCI浓度。 |
|
背景太高 | 非特异性吸附 | 最后一次洗杂后,填料转到新的管子里再洗脱或IP。 |
洗杂不充分 | 增加洗杂次数,每次清洗孵育5-10 min。 增加洗杂液中盐离子浓度。 |