SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein检测试剂盒

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货号: BDAB0160

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￥ 3300.00 / 96T

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产品基本信息

产品货号 BDAB0160
产品名称 SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Nucleocapsid Protein检测试剂盒
类别病原微生物抗原抗体假病毒
注意事项新冠N蛋白试剂盒

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产品详情

稳定性&储存
收到试剂盒后请将标准品、检测溶液 A、检测溶液 B 以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

产品介绍
本试剂盒采用定量双抗夹心 ELISA 分析技术，将 Nucleocapsid Protein 特异性抗体预先包被在酶标板上，之后将标准品和分析样本加入到微孔中，样本中 Nucleocapsid Protein 会被预包被的抗体捕获，清洗掉未结合的物质后，将生物素标记的 Nucleocapsid Protein 单克隆抗体加入到微孔中反应，形成夹心复合物，再加入 HRP 酶标记的链霉亲和素，清洗掉未结合的抗体及酶试剂之后，将显色底物溶液添加到微孔中显色，显色强度与样品中 Nucleocapsid Protein 浓度成正比。
注意：
本试剂盒用于测定支气管肺泡灌洗液、鼻咽拭子样本中 Nucleocapsid Protein 的浓度。

试剂盒组分

序号	样品名称	规格	描述	储存条件
1	预包板	1 板	96 孔聚苯乙烯微孔板（12 条*8 孔），预包被 Nucleocapsid Protein 特异性抗体。	-20℃
2	阳性对照	2瓶	40000pg重组Nucleocapsid Protein蛋白冻干粉（含防腐剂），临用前复溶于 2mL 样本稀释液。	-20℃
3	检测溶液A	1 管	12μL Biotin 标记 Nucleocapsid Protein 单克隆抗体（含防腐剂），临用前用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。	-20℃
4	检测溶液B	1 管	12μL HRP 标记链霉亲和素（含防腐剂），临用前用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。	-20℃
5	样本稀释液	1 瓶	25 mL 稀释液（含防腐剂），用于标准品、待测样本的稀释。	4℃
6	检测溶液稀释液	1 瓶	25 mL 稀释液（含防腐剂），用于检测溶液 A 和检测溶液 B 的稀释。	4℃
7	浓缩清洗液	1 瓶	25 mL （20×）浓缩清洗液（含防腐剂），临用前用去离子水 1:20 稀释至工作浓度。	4℃
8	显色液	1 瓶	12 mL TMB（四甲基联苯胺）。	4℃
9	终止液	1 瓶	6 mL 2M 酸液。	4℃
10	封板膜	4 片	用于实验中封闭酶标板。	常温

在试剂盒保证期内使用

实验所需设备及试剂

450 nm滤光片酶标仪，含630 nm或620nm校正波长更佳
单道或多道微量移液器，移液器枪头
去离子水
500 mL量筒
样品稀释管或不同规格EP管
吸水纸
微孔板振荡仪（可选）

检测前准备工作：
样品收集与储存
1.血清样本：全血室温放置60分钟或4℃过夜，然后1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
2.血浆：使用EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后30分钟内1000 x g离心15分钟，取上清检测，或分装后于≤ -20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
试剂准备
使用前将所有试剂和样本置于室温平衡。
1. 20×浓缩清洗液：如果浓缩液中有晶体析出，加热至室温并轻轻混合，直到晶体完全溶解，25mL 浓缩清洗液使用去离子水定容至 500mL，得到清洗工作液。
2. 标准品：用 2mL 样本稀释液溶解 Nucleocapsid Protein 标准品冻干粉，溶解后标准品母液浓度为 20000pg/mL。震荡混匀后静置 10 分钟，然后进行标准品的稀释，将标准品母液使用样本稀释液依次进行倍比稀释操作得到共计 7 个标准点 20000pg/mL、 10000pg/mL、5000pg/mL、2500pg/mL、1250pg/mL、 625pg/mL、312.5pg/mL、最后再以 100ul 样本稀释液为零标准（0 pg/mL），共计 8 个标准点，建议每个标准点至少做 2 个平行孔。
3. 检测溶液 A（生物素标记）：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。
4. 检测溶液 B（HRP 标记）：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。
5. 显色液: 避光保存，显色时 100μL /孔。
6. 终止液：显色完毕后 50μL /孔。

操作步骤
使用前将所有试剂和样本置于室温，建议对所有标准品和样本进行一式两份的分析
1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和准备工作。
2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入 100μL 稀释好的标准品（共计 8 点）和待测样本，用封板膜封住，37℃孵育 60 分钟。
4. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL 的清洗工作液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移液器或自动洗板机来完成。
5. 每孔加入 100μL 检测溶液 A 工作液（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育 60 分钟。
6. 重复步骤 4 中的洗板程序。
7. 每孔加入 100μL 检测溶液 B 工作液（HRP 标记），用新的封板膜封住，37℃孵育 30 分钟。
8. 弃去孔内液体，每孔加入300ul的清洗工作液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水纸上轻拍，使残留在孔内的液体完全去除，重复洗板5次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多通道移液器或自动洗板机来完成。
9. 每孔加入 100μL 显色液，室温避光显色 15分钟。
10. 每孔加入 50μL 终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀，轻轻震动酶标板板使颜色均一。
11. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度值（O.D.值），如果波长校正可用，则设置为 630 nm 或620 nm，如果波长校正不可用，则从 450 nm 的读数中减去630 nm 或620 nm 的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取 450 nm 的读数，但读值有可能会更高、更不准确。

实验细节说明
1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2. 如果样本检测值超出标准曲线范围，可适当调整稀释倍数并重新测定，或预估样本中蛋白浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
3. 为避免交叉污染，不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。
4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
5. 显色液避光保存，临用前 15 分钟从冰箱取出在室温平衡。
6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水 1：20 稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。
7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触，使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。
8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在 1 个月内使用，未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存，收到试剂盒后请将标准品、检测溶液 A、检测溶液 B、以及预包板保存于-20℃，其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

标准曲线制作
取每个标准品和样本的复孔平均值OD，减去零标准孔平均值OD后，以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线（R 2值越趋近于 1 曲线越精确），然后再将样本的平均值OD带入标准曲线的回归方程式，计算出样本中目标蛋白浓度。
如果样本已经稀释，从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数，即为样本中目标蛋白的实际浓度。

最低检测限、检测范围和精密度

最低检测限：167.3pg/mL
检测范围：312.5pg/mL—20000pg/mL
精密度：批内差 CV<10%；批间差 CV<15%

常见问题解决指南

问题	原因	解决方案
标准曲线差	移液不精确	检查和校正移液器
标准曲线差	标准品准备不正确	进行正确的标准品梯度稀释
O.D 值低	孵育时间太短	保证充足的孵育时间
	温度不正确	试剂平衡至室温并保证孵育温度正确
	试剂体积不正确	检查移液器并确保加样体积与说明书一致
精密度低	移液不精确	检查和校正移液器
	混匀不充分	充分混匀和吸取试剂
	洗涤不充分	按说明书要求充分洗涤和浸泡
背景值高	洗涤不充分	按说明书要求充分洗涤和浸泡
背景值高	清洗液污染	重新配置清洗液
灵敏度低	试剂盒储存不当	试剂盒短期整体保存于4℃，长期保存根据说明书分开保存各组分

备注：
本产品仅用于科研。

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