产品基本信息

• 产品货号 BDAB0161
• 产品名称 Human COVID-19 Nucleocapsid (NP) IgG ELISA检测试剂盒
• 类别 病原微生物抗原抗体假病毒
• 注意事项 新冠抗体检测试剂盒

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产品详情

稳定性&储存
收到试剂盒后请将阳性对照、检测溶液A、检测溶液B以及预包板保存于-20℃，封板膜放置于常温保存,其余试剂请置于 4 ℃保存备用。
试剂盒按推荐温度保存6个月，信号强度降低小于 10%。

产品介绍
本试剂盒采用间接 ELISA 分析技术，将 N 蛋白预先包被在酶标板上，之后将阳性对照样本和分析样本分别加入到微孔中，样本中针对 N 蛋白的 IgG 抗体会和预包被的 N 蛋白结合，清洗掉未结合的物质， 再加入生物素标记的抗人 IgG 二抗，清洗掉未结合的抗体，再加入 HRP 标记的链酶亲和素，清洗掉未 结合的酶，将显色底物溶液添加到微孔中显色，显色强度与样品中针对 N 蛋白的 IgG 抗体浓度成正比。
注意：
本试剂盒用于测定血清和血浆中针对 N 蛋白的 IgG 抗体的浓度。

试剂盒组分
 

序号	名称	描述	规格	储存条件
1	预包板	96孔聚苯乙烯微孔板（12条*8孔），预包被N蛋白。	1板	-20 ℃
2	阳性对照	12μL 针对 N 蛋白重组人源 IgG 抗体， 浓度 0.8mg/mL。	1 瓶	-20 ℃
3	检测溶液A	12μL 生物素标记的抗人 IgG 二抗，临用前用检测溶液稀释液 1:10000 稀释 至工作浓度。	1 瓶	-20 ℃
4	检测溶液B	12μL HRP 标记的链酶亲和素，临用前用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。	1 瓶	-20 ℃
5	样本稀释液	25 mL 稀释液（含防腐剂），用于阳性对照、血清、血浆的稀释。	1 瓶	4 ℃
6	检测溶液稀释液	25 mL 稀释液（含防腐剂），用于检测溶液 A，检测溶液 B 的稀释。	1 瓶	4 ℃
7	浓缩清洗液	25 mL （20×）浓度的清洗液（含防腐剂），临用前用去离子水 1:20 稀释至工作浓度。	1 瓶	4 ℃
8	显色液	12 mL TMB（四甲基联苯胺）。	1 瓶	4 ℃
9	终止液	6 mL 2M 酸液。	1 瓶	4 ℃
10	封板膜	用于实验中封闭酶标板。	4片	常温

在试剂盒保证期内使用

试验所需自备物品:
•450 nm 滤光片酶标仪，含 540 nm 或 570nm 校正波长更佳
•单道或多道微量移液器，移液器枪头
•去离子水
•500 mL 量筒
•样品稀释管或不同规格 EP 管
•吸水纸

检测前准备工作:
样品收集和储存 
1） 血清：全血室温放置 60 分钟或 4℃过夜，然后 1000 x g 离心 15 分钟，取上清检测，或分装后于 ≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
2） 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆，样品采集后 30 分钟内 1000 x g 离心 15 分钟，取上清检测，或分装后于≤-20℃冰箱保存，避免样品反复冻融。
试剂准备
使用前将所有试剂和标本置于室温平衡。
1. 浓缩清洗液: 如果浓缩液中有晶体析出，加热至室温并轻轻混合，直到晶体完全溶解，25mL 浓缩 清洗液使用离子水定容至 500mL，得到清洗工作液。
2. 阳性对照标准品：阳性对照浓度为 0.8mg/mL，使用样本稀释液 1:50 稀释阳性对照得到浓度为 16ug/mL的标准品母液，再使用样本稀释液1:1000稀释标准品母液得到第一个标准点16000pg/mL， 依次进行倍比稀释操作得到共计 7 个标准点 16000pg/mL 、8000pg/mL 、4000pg/mL、2000pg /mL、 1000pg/mL、500pg /mL、250pg /mL、最后再以 100μL 样本稀释液为零标准（0 pg/mL），共计 8个标准点，建议每个标准点至少做2个平行孔。
3. 血清，血浆样本：推荐血清，血浆使用样本稀释液 1:1000~1:5000 稀释后上样。如果样本检测值超出标准曲线范围，可适当调整稀释倍数并重新测定，或预估样本中抗体浓度，在实验之前预先稀 释数个梯度同时进行测定。
4. 检测溶液 A：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液 1:10000 稀释至工作浓度。
5. 检测溶液 B：震荡混匀后用掌上离心机瞬时离心，使液体集中于管底，临用前取合适体积用检测溶液稀释液 1:2000 稀释至工作浓度。
6. 显色液: 避光保存，显色时 100μL /孔。
7. 终止液：显色完毕后 50μL /孔。
使用前将所有试剂和样品置于室温。
建议对所有标准品、对照品和样品进行一式两份的分析。

操作步骤:
1. 按照前面章节的指示准备所有试剂和准备工作。
2. 从板架上取下多余的微孔板条，将其放回装有干燥剂包的箔袋中，然后重新密封保存于-20℃。
3. 每孔加入 100μL 稀释好的阳性对照标准品（共计 8 点）和稀释好的待测样本，用封板膜封住，37℃ 孵育 60 分钟。
4. 弃去孔内液体，每孔加入 300μL 的清洗工作液，轻微震荡后弃去孔内液体，将酶标板倒扣在吸水 纸上轻拍，使残留在孔内的液体全部去除，重复洗板 3 次，此过程也可采用尖嘴喷射瓶，多道移 液器或自动洗板机来完成。
5. 每孔加入 100μL 检测溶液 A 工作液（生物素标记），用新的封板膜封住，37℃孵育 30 分钟。
6. 重复步骤 4 中的洗板程序。
7. 每孔加入 100μL 检测溶液 B 工作液（HRP 标记），用新的封板膜封住。37℃孵育 30 分钟。
8. 重复步骤 4 中的洗板程序。
9. 每孔加入 100μL 显色液，37℃避光显色 10 分钟。
10. 每孔加入 50μL 终止液，孔里的颜色应该由蓝色变至黄色，如果孔内颜色为绿色或颜色变化不均匀， 轻轻震动酶标板板使颜色均一。
11. 擦干酶标板底部水气，立刻用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度值（OD值），如果波长 校正可用，则设置为 540 nm 或 570 nm，如果波长校正不可用，则从 450 nm 的读数中减去 540 nm 或 570 nm 的读数，这种修正可去除酶标板读数中的光学偏差，如果没有校正波长，可直接读取 450 nm 的读数，但读值有可能会更高、更不准确。

实验细节说明
1. 在试剂盒标签上的有效期内使用，不要与其他厂家的试剂盒混合使用。
2. 如果样本检测值超出标准曲线范围，可适当调整稀释倍数并重新测定，或预估样本中抗体浓度，在实验之前预先稀释数个梯度同时进行测定。
3. 为避免交叉污染，不同标准品、样本、试剂的加样需更换移液枪头，每管试剂使用单独的容器储存。
4. 在孵育过程中贴紧封板膜。
5. 显色液避光保存，临用前 15 分钟从冰箱取出在室温平衡。
6. 浓缩清洗液（20×）需使用去离子水 1：20 稀释至工作浓度，去离子水不包含在试剂盒中，需实验人员自备。
7. 终止液为酸性溶液，具有轻微腐蚀性，使用时避免接触皮肤、眼、耳、口等暴露部位，如不慎接触， 使用大量清水冲洗后观察接触部位反应，如情节严重请及时就医。
8. 试剂盒酶标板条可按需拆卸使用，已开封的试剂盒建议在 1 个月内使用，未开封的试剂盒所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存，收到试剂盒后请将阳性对照、检测溶液 A、检测溶液 B、以及预包板 保存于-20℃，其余试剂请置于 4 ℃保存备用。

结果判断:
1.取每个阳性对照和样本的复孔平均值OD，减去零标准孔平均值OD后，以阳性对照的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线（R 2 值越趋近于 1 曲线越精确），然后再将样品的平均值OD带入标 准曲线的回归方程式，计算出样品中目标蛋白浓度。如果样品已经稀释，从标准曲线上算出的浓度须乘以稀释系数，即为样品的实际浓度。
2.推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3.若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数值绘制标准曲线：


最低检测限、检测范围和重复性:
●最低检测限：200pg/mL
●检测范围：250pg/mL—16000pg/mL
●精密度：批内差CV<12% ；批间差CV<15%

备注：
本产品仅用于科研。