产品基本信息

• 产品货号 KX0110050
• 产品名称 BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)
• 类别 转染试剂
• 运输及保存条件 常温运输，4℃保存，稳定保存期12个月。长期保存置于-20℃；
• 注意事项 注意事项 （1） 使用高纯度的RNA是转染成功的关键因素，在转染前确定RNA的含量和纯度（OD260/280＞1.8），实验过程中使用DEPC处理过的耗材和试剂，避免RNase污染；另外RNA制备时盐含量高会导致复合物形成时产生沉淀，因此应将RNA重悬于5%葡萄糖溶液（由DEPC水配制）或DEPC水中； （2） 体内转染所用RNA以及稀释液均为无菌制品，且操作步骤全程无菌； （3） 体内转染时按需现配现用； （4） 为了达到更好的转染效果，可根据实验需要优化RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)的配比，推荐优化比例范围为1:1~1:4 (w/v, RNA: BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo))； （5） 本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断和治疗。
• 产品描述  

  试剂盒组分	规格	保存
  BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)	0.8ml	4℃保存
  10%葡萄糖溶液（DEPC水配置）	4ml	4℃保存

   
   
  产品描述
  BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)是一种新型高效阳离子聚合物，可与RNA (包括siRNA、miRNA、重组RNA)相互作用形成纳米复合物，从而用于RNA的体内递送。BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)具有递送效率高，安全性好等特点。BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)通过内吞作用进入细胞后，表达“质子海绵效应”的特性，缓冲内体pH值，保护RNA不被降解，连续的质子内流也可引起核内体渗透肿胀和破裂，为RNA逃逸到细胞质提供了机制。
   
  产品特色
  n 递送效率高
  n 安全性好
   
  操作步骤
  （1）试剂要求
  为了形成大小均一且形态稳定的BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)/RNA纳米复合物，推荐使用5%无菌无酶等渗葡萄糖溶液（提供10%无菌无酶葡萄糖溶液，体内注射时终浓度稀释至5%）；
  如果稀释RNA的溶液含盐量高可能导致与BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)形成复合物时产生沉淀；
  RNA使用PAGE或HPLC进行纯化。
  （2）推荐RNA量及注射量
  根据动物模型、给药途径、作用靶器官确定RNA使用量，表1给出了在啮齿动物中RNA转染的推荐配比剂量。
  最终注射液RNA浓度不超过0.5 μg/μL以免产生沉淀
  RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)的推荐使用比例为质量体积比1:1 (w/v，1 μg RNA: 1 μL BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo))。
   
  表1. 啮齿动物中RNA转染的推荐配比剂量

  动物	注射方法	复合物配方	RNA最优范围	注射体积最优范围
  小鼠	静脉注射	20 μgRNA+20 μL转染试剂+葡萄糖溶液至100 μL (葡萄糖溶液终浓度为5%)	20-60 μg (1-3mg/kg)	100-300 μL
  	腹腔内注射	100 μgRNA+100 μL转染试剂+葡萄糖溶液至0.4 mL (葡萄糖溶液终浓度为5%)	100-200 μg (4-8mg/kg)	< 1 mL
  	皮下注射	5 μg RNA+5 μL转染试剂+葡萄糖溶液至10 μL (葡萄糖溶液终浓度为5%)	3-5 μg	5-15 μL
  	原位注射	5 μg RNA+5 μL转染试剂+葡萄糖溶液至10 μL (葡萄糖溶液终浓度为5%)	5-10 μg (0.25-0.5mg/kg)	10-20 μL

  注：对于其他动物以及不同注射方式的体内转染配比剂量，可联系技术支持。
  （3）使用说明
  a. 用10%葡萄糖溶液稀释RNA储备液（通常RNA储备液用无菌DEPC水配制），混匀。稀释后的RNA溶液体积为最终所需注射体积的1/2，葡萄糖溶液终浓度为5%。
  b. 用10%葡萄糖溶液稀释BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)。所需BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)体积按照转染试剂与RNA体积质量比1:1计算。转染试剂稀释后体积为最终注射体积的1/2，葡萄糖溶液终浓度为5%，混匀；
  c. 将稀释好的BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)加入稀释好的RNA中，轻轻混匀；
  d. 室温孵育15分钟，此时所形成的复合物可在室温下稳定存放2小时；
  e. 在适当的时间（如，注射后6-96小时）监测基因表达，具体时间取决于注射方式和目标器官。
  f. 以小鼠静脉注射途径给药为例说明复合物配制方式。如，实验注射剂量为25 μg RNA/只小鼠，RNA储备液浓度为1 μg/μL；注射体积为100 μL/只小鼠；RNA与BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)的推荐使用比例为质量体积比1:1 (w/v，1 μg RNA: 1 μL BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo))。因此，单只小鼠需配制如下溶液：
  i. RNA工作液，用的10%葡萄糖溶液稀释RNA储备液；吸取25 μL RNA储备液，加入25 μL的10%葡糖糖溶液，混匀；
  ii. BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)工作液，用10%葡萄糖溶液稀释BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)；吸取25 μL BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)，加入25 μL的10%葡糖糖溶液，混匀。RNA及BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)工作液配制好后，将BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)工作液加入RNA工作液中，轻轻混匀；室温孵育15分钟后，通过尾静脉进行注射。
  其余给药方式的配制过程与本例相同（表2）
  表2. 体内RNA转染的配比剂量举例

  注射方法 （注射量）	注射体积	RNA储备液 （1 μg/μL）	稀释RNA储备液的10%葡萄糖 溶液	BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)	稀释BioShuttle siRNA/miRNA体内转染试剂(in vivo)的10%葡萄糖溶液体积
  静脉注射 （25 μg RNA/只）	100 μL	25 μL	25 μL	25 μL	25 μL
  腹腔内注射 （50 μg RNA/只）	200 μL	50 μL	50 μL	50 μL	50 μL
  皮下注射 （5 μg RNA/只）	20 μL	5 μL	5 μL	5 μL	5 μL
  原位注射 （10 μg RNA/只）	40 μL	10 μL	10 μL	10 μL	10 μL

   
  注：RNA储备液浓度为1 μg/μL
   
   

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