产品基本信息

• 产品货号 BDAA0198
• 产品名称 Recombinant HA-Tag Monoclonal Antibody(12H2), HRP Conjugated
• 类别 抗原抗体
• 推荐应用 WB,ELISA
• 反应种属 Species independent
• 存储缓冲液 1×PBS (pH7.4) ，0.05% proclin300，50% 甘油
• 稀释度 WB 1:30000-1:100000, ELISA 1:5000-1:10000
• 运输及保存条件 -20℃可保存2年，避免反复冻融
• 宿主 Human Recombinant
• 偶联物 辣根过氧化物酶 (HRP)
• 注意事项 1) 本产品为 HRP 直标抗体，需要避光保存于 -20℃或者 -80℃中； 2) 本产品灵敏度高，WB 稀释比值请按照说明书进行，否则可能会出现非特异性条带； 3) NC 膜或者 PVDF 膜在转膜前需要用甲醇激活，转膜后抗体稀释液尽量过量，转膜和抗体孵育过程中不要产生气泡； 4) 本品在 37℃下孵育 30min-60min 即可产生很明显的信号，常温孵育可适当延长时间。
• 背景介绍 血凝素 ( 英文 hemagglutinin) 是指红血球凝聚素， 血凝素具有免疫原性， 抗血凝素抗体可以中和血凝素。HA 标签是一段来源于人流感病毒 血凝素蛋白第 98 ～ 106 位氨基酸的短序列， 氨基酸序列为 YPYDVPDYA，HA 标签的分子量为 1.1 KDa，是目前广泛应用的标签之一。通过重 组 DNA 技术将 HA 标签融合到目的蛋白的 C 端或 N 端，有利于对目的蛋白进行纯化和检测。抗 HA 标签的抗体能对 HA 标签融合蛋白进行 准确的检测和纯化， 通过一定的工艺将辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联至 HA 标签抗体上， 进行 WB 实验时加入发光液 A 和 B，一般是鲁米诺和 过氧化氢，在辣根过氧化物酶 (HRP) 的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的 电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光，实现对 HA 标签融合蛋白实现快速检测。
• 纯化 重组抗体，rProtein A 亲和纯化

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1) 表达系统：293 细胞分泌表达 ; 2) 蛋白信息：带有 HA 标签的重组蛋白，大小≈55KDa； 3) 样本制备：还原Loading Buffer，100℃煮10min，新鲜制备； 4) 上样顺序：1 为约含有 10ng 目的蛋白的培养基原样，2 为 10ng 纯化后的目的蛋白，3 为牛血清白蛋白 (BSA)； 5) 封闭：5%的脱脂奶粉(1XPBST进行溶解)；37℃封闭 1h； 6) 洗涤：1XPBST 摇床 80rpm 清洗 10min。重复清洗3次； 7) 抗体孵育： 10ml用 5%的脱脂奶粉稀释的HRP 直标抗体，37℃摇晃孵育 30min； 8) 显色： ECL 进行显色 ; 9) 结论：Recombinant HA-Tag Monoclonal Antibody(12H2), HRP Conjugated 按照 1：10000， 1：30000 和 1：100000 稀释后（抗体稀释体积 10ml）37℃摇晃孵育 30min， 能够看到很 明显的信号，目的条带位置在 55KDa，随着稀释比值的增大，信号值会有下降，我们推荐客户使用 1：30000 的梯度进行抗体稀释。

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