一、适用范围
    此蛋白A检测ELISA试剂盒用来定量检测重组耐碱性等非天然的蛋白A，只能用于科研和生产，不能应用于人或动物疾病的诊断治疗。本试剂盒提供一个样品的酸化处理方法，把蛋白A从IgG产品中分离出来，在人源化单抗浓度高达2mg/mL的情况下，蛋白A的检测限低至78pg/mL以下。
 
二、检测原理
此试剂盒采用标记生物素系统的双抗夹心的技术方法。酶标板预包被蛋白A的特异性单克隆抗体，含有蛋白A的样品使用样品稀释液进行稀释，然后酸化液混合使蛋白A从抗体产品中的分离出来，样品和预包被在酶标板上的蛋白A捕获抗体反应。再加入生物素标记的检测抗体反应形成夹心三明治复合物。然后洗涤去除没有参与反应的物质，加入亲和素标记的HRP，短暂孵育后，进行TMB显色，然后加入终止液终止显色反应，在450nm处检测吸光值，OD值和样品含量成正比关系。
 
三、需要用到但试剂盒没有提供的东西
1. 10-1000μL的移液器，单道和多道
2. 100mL和1000mL的烧杯
3. 去离子水
4. 各种型号离心管
5. 酶标仪（测450nm）
6. 数据处理分析软件

四、试剂盒组成成分：
 

Component	Product #	Storage
1. Protein A Standard（proteinA蛋白标准品） Recombinant Alkali-tolerant Protein A in a protein matrix with preservative, 50μg/mL, 1x0.1mL	Bk031	2-8°C
2. Biotinylated Antibody（生物素标记的抗体）                                     Biotinylated anti-protein A monoclonal antibody in a protein matrix with preservative, 1x13mL	Bk016	2-8℃
3. Sample Diluent    （样品稀释液）                                     Tris buffered saline with a protein matrix and preservative, 1x30mL	Bk017	2-8℃
4. Denaturing Buffer   （酸化缓冲液）                                Citrate buffer with detergent and preservative, 1x20mL	Bk018	2-8℃
5. 10x Assay Buffer      （10x）洗涤缓冲液                                   phosphate buffer with preservative, 1x30mL	Bk004	2-8℃
6. Streptavidin labeled HRP   亲和素标记的HRP                                                               Streptavidin labeled HRP in a protein matrix with preservative, 1x13mL	Bk019	2-8℃
7. TMB Substrate    （TMB显色液）                                     3,3’,5,5’Tetramethylbenzidine, 1x13mL	Bk007	2-8℃
8. Stop Solution        （终止液）                                   2M sulphuric acid, 1x13mL	Bk008	2-8℃
9. Monoclonal anti-Protein A Coated plate of 96 wells （包被proteinA抗体的96孔酶标板）                12x8 well strips in a bag with desiccant	Bk032	2-8℃

 



































五、试剂准备
1. 本试剂盒使用前请放置室温（20-25度）
2. 洗涤液配制：30mL洗涤液（10x）中加入270mL去离子水，混匀配成300mL工作洗涤液。如果里面有结晶，请溶解混匀再使用
3. 其他试剂不用稀释直接进行使用
 
六、样品处理过程：
1. 样品如果需要稀释，采用试剂盒内的样品稀释液进行稀释，可以在96孔板或EP管中进行。
2. 确保每个含有样品的孔（管）的体积都是100μL。
3. 另外加入100μL的标准品和质控品到孔里。
4. 每个孔再加入50μL酸化液，吹打混匀，室温孵育10min（使样品中proteinA和抗体酸化分离）。
 
七、注意事项：
1. 本试剂盒只可用于科研生产，不可用于体外诊断。
2. 终止液是2M的硫酸，避免接触到眼睛、皮肤和衣物。除此之外，本试剂盒中的试剂不会对人体有任何伤害。
3. 高或低的pH值，洗涤剂，尿素，高盐浓度和有机试剂都是ELISA方法的影响因素，pH的影响很大，样品PH值应控制在7.0-7.4。
4. 如果您在使用过程中有任何问题，请联系本公司技术部门。