BSA(牛血清白蛋白)检测试剂盒

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货号: BF03097-96T

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￥ 2800.00 / 96T

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产品基本信息

产品货号 BF03097-96T
产品名称 BSA(牛血清白蛋白)检测试剂盒
类别 ELISA检测试剂盒

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产品详情

1、试剂盒简介
此定量检测牛血清白蛋白（BSA）酶联免疫试剂盒，采用抗 BSA 的单克隆配对抗体，分别作为包被抗体和检测抗体，组成双抗体夹心 ELISA 检测试剂盒，并与美国标准局的 BSA标准品为参照标准，本试剂盒最低可检测到 1ng/mL 的 BSA。
2、试剂盒组份：

名称	数量（规格）	保存温度
抗 BSA 单克隆抗体包被的 96 孔板条：	1 块	4℃
BSA 标准品：32ng/mL、16ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0ng/mL	各 1 瓶（0.4mL/瓶）	-20℃/-80℃
BSA 内部参比（20ng/mL）：	1 瓶（0.4mL/瓶）
TMB 底物显色液：	1 套（A 和 B 各 6.5mL）	4℃
显色底物终止液（2N，H2SO4）：	1 瓶（13mL）	4℃
样品稀释液	1 瓶（13mL）	4℃
洗涤液（10 倍浓缩）：	1 瓶（50mL）	4℃
使用说明书：	1 份	4℃
酶标记抗 BSA 抗体：	1 瓶（0.13mL）	-20℃/-80℃
酶标记抗体稀释液：	1 瓶（13mL）	4℃

3、所需仪器：
酶标仪（波长 450nm，10μL、100μL、1mL移液器，300μl多道移液器，移液器吸头、37℃恒温水浴箱。
4、操作步骤：
4.1 将浓缩洗涤液用蒸馏水做 10 倍稀释。
4.2 取出包被有抗 BSA 的 96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔，50μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比，各两孔，50μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做 1:100 稀释，加入各反应孔，100μL/孔（酶标记抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在 15 分钟内完成。
4.3 置室温 20~24℃避光反应 1 小时，用洗涤液洗涤四遍，拍干。
4.4 用移液器加 TMB 底物显色液 100μL/孔，请勿震荡，室温 20~24℃避光反应 10 分钟。
4.5 用移液器加终止液 100μL/孔，稍微震荡 5s 混匀。
4.6 在酶标仪 450nm 波长处读数。5、注意事项：
5.1 如样品中 BSA 含量高于 32ng/mL，可将样品做适当稀释。
5.2 样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。
5.3 反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。
5.4 洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。
5.5 开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置 4℃密闭保存。

5.6 在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免被有 BSA 的环境和物品污染。

6、结果判定：
6.1 实验有效参数：
实验结果须满足以下有效参数为成立：
0ng/ml OD 值≤0.1； 32ng/ml OD 值≥0.80；阳性参考 18~22ng/ml； R2≥0.98；
6.2 计算：

在 EXCEL 里面以标准浓度为横坐标，消零 OD 值为纵坐标作散点图，添加趋势线，再显示曲线方程和R2 值，将检测样品 OD 值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。

标准浓度	OD1	OD2	OD3	平均值	消零 OD
0	0.069	0.062	0.064	0.065	0
1	0.111	0.109	0.113	0.111	0.046
2	0.13	0.127	0.131	0.129	0.064
4	0.191	0.192	0.193	0.192	0.127
8	0.332	0.319	0.327	0.326	0.261
16	0.583	0.588	0.596	0.589	0.524
32	1.039	1.025	1.054	1.039	0.974

6.4 判定：

在标准曲线中，设 OD0~16ng/mL 为区间 A；OD16~32ng/mL 为区间 B；大于 OD32 ng/mL 为区间 C。

6.1.1 如测得的 OD 值小于标准曲线中 2ng/mL 对应 OD 值，则 BSA 含量测定结果计为小于 2ng/mL。
6.1.2 如不同稀释浓度的样本测得的 OD 值均位于区间 A，则最终结果计算取其最低稀释度的测定值。
6.1.3 如不同稀释度的测定值均位于区间 B 或同时位于区间 A 和 B 或同时位于区间 B 和 C，则取其最接近OD16ng/mL 的测定值。
6.1.4 如不同稀释度测定值均位于区间 C，则需将样本做进一步稀释测定，使其测定值居 2~32ng/mL 所对应的 OD 值区间，计算方法按上述 6.1.2-4。
6.1.5 如高稀释度测得OD 高于低稀释度或未稀释的样本OD，则可能是操作失误或样本中BSA 含量过高（HOOK效应），需重试或调整稀释度。
6.1.6 最终结果要考虑稀释因素（实际 BSA 含量＝计算值 X 稀释倍数）。

7、本试剂盒技术指标
7.1 检测限和定量限
检测限：零浓度标准品加上两倍的标准差（20 个零孔计算值），本试剂盒检测限计算为 0.2ng/mL(ppb)。定量限为标准曲线检测下限，1 ng/mL。
7.2 准确度和精密度
计算批内批间变异系数，在高中低三个浓度（20、10、5）下五个重复检测计算批内变异系数，不同时间重复三次计算批间变异系数，CV%均小于 10%。
7.3 交叉反应

浓度(ng/ml)	SD	回收率%	CV%	浓度(ng/ml)	SD	回收率%	CV%
20	0.06	107.3	5.6	20	0.047	102.6	4.6
10	0.049	105.4	4.7	10	0.022	101.2	2.2
5	0.059	99.66	5.9	5	0.028	97.6	2.9

本试剂盒对人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，鱼明胶没有交叉反应，而对山羊血清有 10%的交叉反应
（以相同 OD 值时 BSA 和山羊血清的浓度的比值的百分数为准）。

和 BSA 没有交叉反应的物质
反应物质	反应浓度
人血白蛋白	10mg/ml
小鼠血清	10%
兔血清	10%
鱼明胶	1%

7.4 钩状效应
当样品浓度远高于标准曲线最高浓度的时候，会产生 HOOK 效应，即反应 OD 值小于 32ng/mL 的 BSA 时候的浓度，本试剂盒为 500μg/mL 以上。

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