人β淀粉样蛋白（Aβ1-42）酶联免疫吸附检测试剂盒
预期用途：用于体外定量检测人脑脊液中 Aβ1-42 浓度
 

货号	规格
BDEL-0813	96T

 

试剂盒组成

序号	名称	规格数量	储存温度
1	人 Aβ1-42 标准品	5 ng/管，2 管	2-8 ℃
2	酶标板（可拆卸）	1 块	2-8 ℃
3	浓缩洗涤液（20×）	20 mL/瓶	2-8 ℃
4	稀释液	20 mL/瓶	2-8 ℃
5	检测抗体	10 mL/管	2-8 ℃
6	TMB 底物	20 mL/瓶	2-8 ℃
7	终止液	10 mL/瓶	2-8 ℃
8	封板覆膜	2 张	2-8 ℃

 
储存条件：2-8 ℃。
有效期：12个月，标准品溶解后，分装保存于-80 ℃，避免反复冻融，应 1 月内用完。
 
一、检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。用捕获抗体包被酶标板，实验室样品或标准品中的 Aβ1-42 会与捕获抗体结合，游离成分被洗去。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-抗体的免疫复合物，游离成分被洗去。加入显色底物TMB，TMB 在 HRP 的催化下显现蓝色，加终止液后变为黄色。用酶标仪在 450 nm 波长处测 OD 值，Aβ1-42 浓度与 OD450 值之间呈线性关系，绘制淀粉样蛋白标准曲线，通过代入公式计算出样品中 Aβ1-42 浓度。
 
二、样品要求
脑脊液收集后 1000 ×g 离心，20 min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。样品收集后如不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-80 ℃，避免反复冻融。
三、检测方法：
检测前准备工作：
1.    请提前 20 分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温.
2.    将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1:19），未用完的放回 4 ℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用 40 ℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过 50 ℃ ,使用时洗涤液应为室温），当日使用。
3.    标准品：平衡至室温，轻轻打开瓶盖，加入稀释液 1 mL 至冻干标准品中，盖好管盖，静置 10 min，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为 5 ng/mL)。然后根据需要进行倍比稀释（注: 不要直接在反应孔中进行倍比稀释,建议配制成以下浓度：500、 250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/mL，稀释液直接作为空白孔 0 pg/mL。取 100 μl 5 ng/mL 的标准品加入含有 900μL 稀释液的 EP 管中，混匀即可配成 500 pg/mL 的标准品，其余浓度依次进行倍比稀释。

 
洗涤方法：
1 自动洗板机：每孔加入洗涤液 300 µL，注入与吸出间隔 60 秒。
2 手工洗板：甩尽孔内液体。在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液 300 µL, 浸泡 3 分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。
 
操作步骤：
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：
a. 分别设标准孔，空白对照孔，待测样品孔。空白对照孔加入稀释液 50 µL, 其余标准孔、待测样品孔每孔分别加入 50µL 标准品或待测样品
b. 空白对照孔加入稀释液 50 µL, 其余标准孔、待测样品孔每孔分别加入 50µL 检测抗体。
c. 轻轻晃动混匀，给酶标板覆膜。室温孵育 1.5 h。
d. 弃去孔内液体，甩干，1×洗涤液洗板 5 次。
2.加显色底物
a. 每孔加入显色底物（TMB）100µL。
b. 室温避光孵育 15-30 min，当标准孔出现明显蓝色梯度时，即可终止。  
注意：TMB 不能接触铝制容器或其它金属材料
3.加终止液  
每孔加入终止液 50µL。终止反应，此时蓝色立转为黄色。
4.读数
立即用酶标仪在 450 nm 波长测量各孔的光密度值（OD 值）。酶标仪应根据需要提前预热。
参考值：
由于实验操作条件的不同（如操作者，移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的 OD 值会有所差异。 以下数据和曲线仅供参考，实验者需要根据自己的实验建立标准线。

 
四、检验结果的解释
1. 每个标准品的 OD 值减去空白孔的 OD 值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如 curve expert 1.3 或 1.4，在软件界面即可根据样品 OD 值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的 OD 值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
3. 若样品浓度高于标准曲线上限，应适当稀释后重新测定，计算浓度时乘以相应的稀释倍数。