【产品介绍】
人乳头瘤病毒 (Human Papillomavirus, 简称 HPV) 主要通过人体密切接触，如性传播的病毒，可引起人类多种增殖性上皮病变，包括乳头状瘤（疣）和瘤样病变，其所引发的相关致死性的恶性肿瘤和多种传播疾病对人类健康具有严重的危害性。 HPV 的中和抗体水平是 HPV 相关研究开发的关键性指标。
博奥龙从 Genbank 公开的 HPV L1 和 L2 基因序列中选取相关基因，构建基因表达质粒，再和基因报告质粒共转染293FT细胞构建了HPV的假病毒。该病毒含有HPV病毒的衣壳蛋白，病毒内包裹绿色荧光蛋白（GFP）的 DNA 序列。

【预期用途】
可以用于HPV抗血清或者中和抗体滴度检测

【假病毒感染细胞图片(示例)】

 
 


 【主要成分】
Brij58、Benzonase、Plasmid Safe、DPBS-Mg、NaCI、葡萄糖、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钾和假病毒。

【存储条件及有效期】
冻存于-75±5℃以下，有效期大于12个月。

【使用方法】
1.收集对数生长期的293FT细胞，用血球计数板计数，用DMEM完全培养液（含10%胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸、6mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、1%青链霉素的DMEM高糖培养基）稀释细胞浓度至1.5×l0⁵个/mL。将细胞接种于96孔细胞培养板中，100μl/孔。放CO2培养箱中孵育4-6h后用于假病毒的感染。
2.假病毒稀释：取出冻存的假病毒置于冰上融化或4±1℃或常温条件下自然融化，待其完全融化后，将假病毒使用DMEM完全培养基（含10%的胎牛血清）稀释到工作浓度。因假病毒对不同细胞的感染效率不同，正式实验前建议进行预实验，以确定最适病毒量 (产品标签上标明了参考滴度,优先推荐的病毒稀释倍数=参考滴度/2)。
3.待测样品和假病毒的预混 ：取新的 96 孔细胞培养板，每孔加入55μl样品和55μl假病毒稀释液，轻拍四周混匀，同时设完全培养液替代样品的假病毒对照孔和无样品无假病毒的空白对照孔。
4.待测样品和假病毒混合液的预孵育 ：将 96 孔培养板 4℃冰箱放置 1 小时。
5.假病毒感染：从 96 孔培养板各孔中吸取 100μL 的假病毒和待测样品组合物及对照，贴壁缓缓加入提前已铺好细胞的培养板对应孔中，轻拍培养板四周混匀。
6.感染检测：细胞感染假病毒第三天,通过观察绿色荧光蛋白表达的活性判定感染效率。
7.为了更好的保持产品活性，假病毒产品尽量减少反复冻融，建议客户收到产品后，使用DMEM完全培养基（含10%的胎牛血清）稀释到1ml，然后分装成50μl的小包装后冻存于-75±5℃保存，分次使用（也可以依据客户自身实验需要进行分装）。

【注意事项】
1.我们提供的HPV假病毒为复制缺陷型病毒，即该病毒感染目的细胞后不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒；
2.实验操作需要在生物安全柜条件下进行，并穿戴好实验服、口罩和手套等个人防护用品；
3.如果实验时本品不慎溅出，请立即使用84消毒液对其进行灭活处理，如果溅到眼睛、皮肤或其他身体部位请立即使用大量清水冲洗；
4.使用本品所产生的实验废弃物需要通过高压灭菌处理后按照医疗废弃物处理要求进行处理。
5.博奥龙HPV假病毒产品滴度定义方式：使用仪器读数（酶联免疫荧光斑点分析仪，CTL，S6 Universal），以读数为700时（可以表示为仪器检测的范围内700个细胞有荧光），当前假病毒稀释倍数为该批次产品的滴度值。