试剂盒组成 |
10 gels |
125 gels |
保存 |
上层胶溶液(2× ) |
8ml |
80ml |
4℃(常温运输) |
彩色上层胶缓冲液(2× ) |
8ml |
80ml |
4℃(常温运输) |
10%下层胶溶液(2×) |
30ml |
250ml |
4℃(常温运输) |
下层胶缓冲液(2× ) |
30ml |
250ml |
4℃(常温运输) |
改良型促凝剂 |
1ml |
8ml |
-20℃(常温运输) |
备注:改良型促凝剂长期保存 -20℃ (常温运输),收到后按照上面指示的温度保存各成分,一年有效
产品介绍
SDS-PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)采用预混液形式的配方,制胶时只需加入改良型促凝剂即可,方便快捷。上层胶为彩色(紫色)凝胶,便于点样。本产品制备的凝胶 也可用于非变性 PAGE 胶电泳实验。
本试剂盒配备改良型促凝剂,无 TEMED 刺激性气味 ,稳定性好、催化效果佳,制备一 块或多块凝胶仅需二十分钟左右。为方便取用,已开盖的改良型促凝剂可置于 4℃保存至少 3 个月。
制胶数量(125 gels ):125 块(0.75 mm);>90 块(1.00 mm );>60 块(1.50 mm )
操作步骤
1.根据需要制备的凝胶厚度,取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液,混匀;加入相应 体积的改良型促凝剂,混匀。
2.立即将配制好的下层胶注入玻璃板内,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5 cm 即可,加入适量水或无水乙醇液封,待下层胶凝固,约 10-15 min (当液封溶液和胶之间可见明显分界线时,说明胶已凝固),倒去上层溶液。
注:1)溶液配制体积是过量的,可留少许于管中,便于观察凝胶状态;
2)室温较低时,凝固速度较慢,需适当延长凝胶时间。
3.根据需要制备的凝胶厚度,取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液,混匀;加入 相应体积的改良型促凝剂,混匀。
4.立即将配制好的上层胶注入玻璃板中,插入梳子,待上层胶凝固(5-10 min)拔出 梳子。
凝胶配制如下:
下层胶配制 |
上层胶配制 |
凝胶厚
度 |
10%下层胶
溶液(2×) |
下层胶缓
冲液(2×) |
改良型
促凝剂 |
凝胶厚度 |
上层胶溶
液(2×) |
彩色上层胶
缓冲液(2× ) |
改良型
促凝剂 |
0.75 mm |
2.0 mL |
2.0 mL |
40 μL |
0.75 mm |
0.5 mL |
0.5 mL |
10 μL |
1.00 mm |
2.7 mL |
2.7 mL |
60 μL |
1.00 mm |
0.75 mL |
0.75 mL |
15 μL |
1.50 mm |
4.0 mL |
4.0 mL |
80 μL |
1.50 mm |
1.0 mL |
1.0 mL |
20 μL |
注:1)尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液;
2)推荐电泳条件:150V,约 50 min 或 200 V,约 35 min。
注意事项
1.本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应,类似于预制胶,与传统 PAGE 胶相比,蛋 白条带分离效果更好,小分子蛋白(比如 10 kDa)也可以清晰地分离开,且蛋白条带 更窄更锐利。
2.改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整,加入较多的促凝剂可以加速凝胶,反之亦然。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,温度过高时建议适当降低促凝剂的使 用量。
3.使用前胶溶液及缓冲液恢复至室温,可有效避免凝胶过程中气泡的产生。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
凝胶浓度及分离范围参考:
胶浓度 |
分离范围(kDa ) |
最佳范围(kDa ) |
7.5% |
35-250 |
50-150 |
10% |
20-180 |
30-100 |
12.5% |
10-150 |
20-70 |
15% |
8-100 |
10-50 |