产品描述：

           本产品 可针对血卡 或血斑样本，无需进行核酸提取， 采用竞争性等位 基因特异性扩增 原理和方法，进 行 SNP 基 因 分 型 检 测 。 本 产 品 预 混 液 (Blood-Card-Direct Real-Time Competitive Allele-Specific Detection Master Mix, 2×)中已经包含检测所需要的通用探针，客户只需根据检测位点设计两条位点特异性引物及一条 下游引物即可开展实验。使用新型通用探针可以进行实时荧光检测。
           使用试剂盒中特殊的 Buffer BCL03 组分，对血卡样本进行简单预处理后直接进行竞争性等位基因特异 性扩 增反应，所得 SNP 分型 检测的结果可媲 美以核酸提取后的高纯 DNA 产物 作为模板的反应效果，具有
节省操作时间和降低费用的显著优点。
          本产品中使用了经过定向改造和抗体封闭的直扩型热启动聚合酶(Hot-Start DNA Polymerase)，配合条件 优化的热启动专用缓冲体系，对血卡样本中的 PCR 抑制物具有极强的耐受性，可有效避免类似于非热启动 型聚合酶导致的非特异性扩增反应，从而提升 PCR 扩增效率。同时也能够针对不同 GC 含量的基因完成扩 增，获得理想的分型结果。

产品特点

1.无需核酸提取或者纯化，直接对血卡样本进行竞争性等位基因扩增反应检测 SNP，省时省力；
2.预混液(Master Mix, 2×)中所含通用探针可以进行实时荧光检测，用户仅需设计普通引物即可，大大降低 检测成本；
3.使用本试剂盒进行竞争性等位基因扩增反应效果可媲美以高纯 DNA 提取产物作为模板的反应效果； 
4. 可以进行 Hot Start 法 PCR 反应，具有高扩增效率、高扩增灵敏度的特点；
5. 可针对高 GC 含量片段进行有效扩增，扩增能力强。

扩增体系和条件

1. 样本前处理

1）向 0.2 mL EP 管（或 96 孔 PCR 板）中加入 50 µL Buffer BCL03；
2）用剪刀（或者打孔器）剪取 1~2 片 2 mm 尺寸的干血片，加入到 Buffer BCL03 中，瞬离确保干血片完全浸入到液体中；
3)  将 EP 管于 95℃下加热 5min 后，置于平板离心机 4000g 离心 2min（或台式离心机 12,000RPM 离心 2min ），可直接吸取 上清液作为 PCR 反应模板使用。

2.反应体系构建

备注：
*1:可预先将检测引物按照下表配置方法，配置成 72× Primer Mix：


*2:建议模板加入量为总反应体积的 10~30%，优选加入量为 20% ，请勿超过 30% 。如需加入更多量模板请与本公司 技术人员联系；样本若需要长期保存请将上清液置于-20℃保存。

3.反应程序

*1: Touch-down ，65~57 ℃, 每个循环下降 0.8℃；
*2:通用探针的荧光基团分别为 FAM 和 VIC，进行荧光收集时需选择该两个通道。若选择终点法收集荧光，请设置在 30℃， 1 min 进行。


应用实例
使用本试剂盒，对 44 个血液样本进行处理后，使用直接竞争性等位基因扩增方法对两个位点（rs429358 和 rs1801131）进行 SNP 基因分型，实验结果显示成功分型，且 cluster 集中于预设区域。

注意事项

1.预混液(Master Mix, 2×)使用前上下轻柔颠倒数次，确保各试剂成份完全混匀，并短暂离心收集试剂至容 器底部，试剂如未充分混匀可能导致反应性能下降；
2.Master Mix 置于 4℃的保存时间不应超过 1 周，长期保存置于-20℃；
3.配制 PCR 反应 Mix，依次加入各成份后需涡旋混匀并进行短暂离心；
4.Master Mix 对光敏感，应避免长时间和强光照射；
5.本产品仅供科学研究使用。