20ul的样本不足以进行层析，步骤4再加50ul稀释缓冲液是为了带动这些样本完成层析，此外，稀释缓冲液中的成分有一定封闭效果，有助于保证特异性，50ul的体积是根据实验室的延续下来的稳定体系，不建议自行更改。
关于稀释倍数的计算，阳参/检测范围是按照步骤2中的浓度标定的，因此样本计算时，步骤4中的稀释无需再额外计算。