8－AG（即8－氮鸟嘌呤）是一种碱性细胞杀伤因子。细胞DNA的合成主要是两个途径，一个是主要途径，一个是补救途径，而HGPRT酶（即次黄嘌呤－鸟嘌呤核糖转移酶）是补救途径嘌呤的主要合成酶，正常情况下，细胞可以同时通过这两种途径来合成DNA。而8－AG也是一种嘌呤，自然也可以被认为是一种合成DNA的原料，但由于它是有毒的，它的存在会杀死细胞。而HGPRT酶缺陷的骨髓瘤细胞不能通过补救途径合成DNA，所以就可以存活。因而经8－AG筛选后的sp2/0细胞都是HGPRT酶缺陷株。

融合之前的效价大约16万，阈值标准是0.2和两倍阴性血清值取最大值，做了三次融合，阳性血清（融合前小鼠的血清）是有阳性结果，但板子上全部是阴性结果。客户每次融合的板子做5块，Sp2/0细胞单独用HAT培养，大约7天后全部死亡 可以建议客户增加融合后做板子的数量，在10-20块之间，同时适当增加HAT培养基的浓度，换用其他批次Sp2/0细胞。

可能存在的原因：

1、使用乳化器30多分钟还没有形成油包水

• 可能存在的原因：
  （1）抗原缓冲液里有甘油、尿素、有机溶剂等，会影响乳化效果
  （2）抗原的浓度太低。
  下面是1.5mg/ml的抗原和弗氏完全佐剂等体积混合，乳化5分钟的实验结果：
  

 

• 下面是水和弗氏完全佐剂等体积混合，乳化15分钟的实验结果：
  


•