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常见问题
常见问题
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Q1:
可感染细胞的假病毒目前情况
可感染细胞的假病毒目前主要由
HIV骨架和VSV骨架两种,两种病毒都可以用于细胞实验和动物实验,VSV骨架假病毒做动物实验效率会略好一些。我们的假病毒是HIV骨架的。
HIV骨架假病毒三个质粒=慢病毒(HIV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp和荧光素酶)
VSV骨架假病毒三个质粒=水泡性口炎病毒载体(VSV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp或荧光素酶)
假病毒的动物实验:先用腺病毒让动物的部分组织或器官有
ace2细胞的过表达,在用可感染细胞的假病毒进行侵染实验
类别
产品情况
货号
名称
原始株
有
BDAA0026
FNV-SARS-CoV-2-S
(可感染细胞)
Alpha
无
Beta
只有三个点突变株(
E484K
、
K417N
、
N501
)
BDAA0084
FNV-SARS-CoV-2-S(
可感染细胞
)(E484K
、
K417N
、
N501Y)
Gamma
只有三个点突变株(
E484K
、
K417N
、
N501
)
BDAA0084
FNV-SARS-CoV-2-S(
可感染细胞
)(E484K
、
K417N
、
N501Y)
Delta
有
BDAA0115
FNV-SARS-CoV-2-S(
可感染细胞
)(B.1.617.2)(delta)
Lambda
无
Omicron
有
BDAA0117
FNV-SARS-CoV-2-S(
可感染细胞
)(B.1.1.529)(Omicron)
Q2:
有感染活性的假病毒内的S基因的3.8k基因序列或引物序列是什么
只
提供
相关参考文献,序列不对外公布
Q3:
说明书中的mock 是什么
mock
是空细胞
Q4:
实验室细胞房能使用吗?对实验室和实验人员有无伤害?
假病毒里没有任何的新冠核酸,仅仅是假病毒表面有S蛋白,没有复制性的,实验室细胞房可以使用,也没有致病性。我们说明书里写的相对比较保守。
Q5:
感染细胞的新冠假病毒可以感染小鼠么
我们的新冠假病毒,做过动物实验,效果不好,检测不到,不建议用于感染小鼠。
Q6:
可感染细胞的假病毒目前情况
可感染细胞的假病毒目前主要由HIV骨架和VSV骨架两种,两种病毒都可以用于细胞实验和动物实验,VSV骨架假病毒做动物实验效率会略好一些。我们的假病毒是HIV骨架的。HIV骨架假病毒三个质粒=慢病毒(HIV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp和荧光素酶);VSV骨架假病毒三个质粒=水泡性口炎病毒载体(VSV)的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFp或荧光素酶)
Q7:
PCR定量引物
ZsGreen-QPCR-F:ACGAGTCCAAGTTCTACGGC;ZsGreen-QPCR-R:CGGGGATGATCTTCTCGCAG
Q8:
荧光是单荧光还是双荧光
目前都是单荧光,萤火虫的
Q9:
产品颜色
个别产品是偏粉红色,不影响使用
Q10:
可感染细胞的假病毒是怎么构建的
是HIV骨架改造的,加了S蛋白包膜,载体质粒里有GFP和荧光素酶。常规慢病毒三个质粒=慢病毒的包装质粒+VSVG包膜外壳+载体质粒(含有目标基因);可感染细胞的假病毒三个质粒=慢病毒的包装质粒+新冠S蛋白包膜外壳+载体质粒(含有GFP和荧光素酶)
Q11:
假病毒里的荧光素酶用什么试剂盒激活?
我们用promega 的
Q12:
说明书中的mock 是什么
mock是空细胞
Q13:
假毒是HIV骨架吗
是
Q14:
我们的可感染细胞的假病毒,可以侵染Vero细胞么?
侵染Vero细胞没做过测试,目前我们做过测试过的只有经过ACE2过表达的293系列细胞,还有野生型的huh7细胞,但是huh7 的效率不高,还有一个bhk21细胞
Q15:
待感染细胞的每孔用量
1*10的4次方,培养24小时(约增长1.5倍左右,也就是2*10的4次方) 综合:待感染细胞和假病毒病毒的数量比推荐是:1:5~1:1
Q16:
可感染细胞的用量
96孔板每孔的可感染细胞假病毒用量2-10ul,假病毒浓度是1-10的7次方,1ul也就是10的4次方
Q17:
我们可感染细胞的假病毒,用检测新冠的S蛋白试剂,可以检测出来的吧?
理论上是可以的,但是我们没检测过
Q18:
做中和实验,下降多少有效
这个很难定义,50-70%可以认为效果比较好
Q19:
荧光素酶的值
不同仪器、试剂盒不同,大概10的5-6次方
Q20:
滴度是多少
梯度稀释法,大于1*10的7次方。我们用的是梯度稀释法,是用一样数量的细胞,例如细胞数量都是1E+5,如果加了10ul病毒,细胞全部感染满了,那就是过度感染,如果加了1ul感染了百分之10,那就是1ul的病毒夜感染了1E+4个细胞,那么1ml就可以感染1E+7个细胞,差不多是这样算出来的
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