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常见问题
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Q1:
Control组细胞死亡可能原因有哪些?转染的前未去除生长培养基,在转染时有血清和双抗是细胞死亡的原因吗?还是只会影响转染试剂发挥功效。
有血清和双抗,不会导致细胞死亡,会影响到转染效果。
注意摸索最佳浓度,转染试剂浓度过高,细胞肯定会死亡;
另外还要注意细胞主要培养基占大多数,否则不等渗条件,也会造成细胞死亡。
Q2:
能否用可见光观察?
不能
Q3:
体外检测时,是否需要将细胞裂解?
说明书提供的是体外生物发光实验步骤,无需裂解;如您需要进行体外报告基因检测,需要裂解细胞,具体步骤请查阅网页,根据您的具体需要进行修改即可。
Q4:
体外检测时,是否需要将细胞裂解?
说明书提供的是体外生物发光实验步骤,无需裂解;如您需要进行体外报告基因检测,需要裂解细胞,具体步骤请查阅网页,根据您的具体需要进行修改即可。
Q5:
Q:标记不同分子量的蛋白,怎么计算呢?
为了确保每个伯氨基(NH2-)都能被标记,标记物必须充足且略有过量。
标记物与蛋白/抗体之间的摩尔比至关重要。标记物含量低,可能造成蛋白/抗体无法被充分标记;标记物过量则可能引起背景信号增加。因此,合理的标记策略是优化实验效果的关键。该试剂盒生物素和蛋白的比例可以尝试10:1,进一步根据后续使用效果进行调整。
在摩尔比确定的情况下,分子量(kDa)较大的蛋白需要蛋白含量(ug)相对减多
Q6:
HPV16,18型假病毒,用病毒裂解液裂解后,能不能检测出E6,E7抗原?
没有E6 和E7
Q7:
用什么样的电泳缓冲液和Loading?
电泳缓冲液:Tris-Glycine 和MOPS buffer都可以使用; 上样缓冲液Loading:还原和非还原都可以
Q8:
货号ZFB1001能作为 BF06215快速检测卡的阳性对照吗?
可以
Q9:
含有磷酸酶抑制剂吗?能用于抑制磷酸化基团降解吗?
蛋白酶抑制剂,不能用于磷酸酶的抑制
Q10:
这个试剂盒能否用于植物样本?
未测试过,无相关数据
Q11:
添加因子加到细胞里面的背景是什么样的
Q12:
溶解后的状态是什么状态
Q13:
可以用全菌来免疫吗
细菌表面都是多糖,很难得到蛋白表位抗体,多糖表位抗体效价高。可以通过BCA定量后去免疫1-5ug尝试
Q14:
为什么我的抗体大部分是IgM?
糖蛋白类免疫原,如CA125,极易产生IgM,很难获得IgG
Q15:
说明书步骤2中,最终定容体积小于0.5ml,是否会影响标记效果?
不影响,譬如标记0.2mg抗体,可定容至150ul
Q16:
我的纯化没富集到抗体,流穿和洗洗杂、洗脱液,可以再拿去过一遍柱子吗?
可以的,不过如果样品本身的抗体量就不是很多,可能再次纯化获得的抗体量也不会很多,甚至因为损耗会更少
Q17:
请问这个磁珠,可以回收使用吗?可以回收几次?
如果是用多肽竞争洗脱或者酸性洗脱,可以再生重复使用3-5次。如果是变性洗脱,无法再生重复使用。
Q18:
这款能做CRISPR-Cas9 RNP基因编辑的数据有吗?用量信息呢?
Cas9 protein, sgRNA, 蛋白转染试剂,质量比,分别是2, 1, and 4 μg/mL,可以自己在此基础上优化
Q19:
二抗的特异性是否做过实验验证,与其他的亚型或其他物种的同种亚型有无交叉反应?
抗亚型的二抗,都和该物种其他亚型无交叉,如抗小鼠IgG2a和抗小鼠IgG2b、抗小鼠IgG1、抗小鼠IgG3、抗小鼠IgA、抗小鼠IgM无交叉;但没有做过和其他物种亚型是否交叉。
我们的二抗,同物种范围内,都具备特异性,排除交叉问题。需要排除不同物种之间交叉反应的二抗,可以联系我们进行个性化定制。
Q20:
IFA是什么实验方法?
RSV感染细胞,铺板,待细胞至~90%丰度后,PBS洗涤、固定、封闭,然后其他步骤与ELISA一致,添加抗体,但二抗不是HRP标记的二抗,而是FITC或罗丹明标记的二抗。
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